P4850

Proteinase K aus Tritirachium album

buffered aqueous glycerol solution, Molecular Biology, ≥800 units/mL

• Synonym(e): Endopeptidase K
• CAS-Nummer: 39450-01-6
• UNSPSC Code: 12352204
• NACRES: NA.54
• EG-Nummer: 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• MDL number: MFCD00132129
• eCl@ss: 32160410
• Concentration: ≥10 mg/mL, ≥800 units/mL

Eigenschaften

• grade: Molecular Biology
• Quality Segment: 200
• form: buffered aqueous glycerol solution
• mol wt: 28.93 kDa
• concentration: ≥10 mg/mL, ≥800 units/mL
• impurities: ≤0.5 ppm DNA (PicoGreen^® assay)
• foreign activity: DNase, Nickase and RNase, none detected
• storage temp.: 2-8°C

Beschreibung

Application

Das Produkt wurde zur Untersuchung seiner Vorbehandlungseffekte auf Seidenfibroin verwendet. Die in dieser Studie analysierten Aspekte umfassten die kristallografischen Eigenschaften von Hydroxylapatit (HAp) sowie die Mikrostruktur und -härte der Kompositen. Das Enzym wird ebenfalls zur Erleichterung des Zugangs von Sonden zur rRNA mithilfe von FISH-Techniken zur Detektion von pathogenem Staphylococcus aureus verwendet.[1]

Nützlich zur proteolytischen Inaktivierung von Nukleasen bei der Isolierung von DNA und RNA.
Entfernt Endotoxine, die an kationische Proteine wie Lysozym und Ribonuklease A binden.
Berichten zufolge nützlich für die Isolierung von Leber-, Hefe- und Mungbohnen-Mitochondrien
Bestimmung der Enzymlokalisierung auf Membranen
Behandlung von Paraffinschnitten zur Freilegung von Antigenbindungsstellen zur Antikörpermarkierung.
Verdauung von Proteinen aus Hirngewebeproben für Prionen in der TSE-Forschung.

Proteolytische Deaktivierung von Nucleasen während der Isolation von DNA und RNA

Proteinase K aus Tritirachium album wird verwendet:

• zur Herpesviren-DNA-Extraktion in endometrialen Epithelzellen vom Rind
• zur Viren-RNA-Extraktion aus Nasenabstrichen
• als Komponente von Phase-Lock- und Direkt-PCR-Lysepuffern

Biochem/physiol Actions

Proteinase K weist eine weite Spezifität auf und baut selbst im nativen Zustand viele Proteine ab. In erster Linie spaltet es die Peptidbindung nahe der Carboxylgruppe von aliphatischen und aromatischen Aminosäuren mit blockierten α-Aminogruppen.[2][3] Das Molekulargewicht von Proteinase K aus der Aminosäuresequenz beläuft sich auf 28.930 Da und aus SDS-PAGE auf 28.500 Da.[4] Der optimale pH-Wert liegt zwischen 7,5 und 9,0[2] und der isoelektrische Punkt beträgt 8,9.[2] Ca²⁺ (1–5 mM) ist für ihre Aktivierung erforderlich. Proteinase K wird von DIFP (Diisopropylfluorphosphat) oder PMSF (Phenylmethylsulfonylfluorid) gehemmt.

Proteinase K ist eine stabile und hochreaktive Serinprotease. Ergebnisse von Kristall- und Molekularstrukturstudien lassen darauf schließen, dass das Enzym zur Subtilisin-Familie mit einer katalytischen Triade (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴) im aktiven Zentrum gehört. Es ist in einer Reihe von Umgebungen stabil: pH, Puffersalze, Detergenzien (SDS) und Temperatur. In Gegenwart von 0,1–0,5 % SDS bleibt Proteinase K aktiv und verdaut zahlreiche Proteine und Nukleasen in DNA-Präparationen, ohne die Integrität der isolierten DNA zu beeinträchtigen.

Physical form

Lösung in 40 % Glycerin (v/v) mit 10 mM Tris-HCl (pH 7,5) und 1 mM Calciumacetat.

Other Notes

Eine Einheit hydrolisiert harnstoffdenaturiertes Hämoglobin und erzeugt eine Färbung, die 1,0 μmol Tyrosin pro Minute bei pH 7,5 und 37 °C (Farbe vom Folin-Ciocalteu-Reagenz) entspricht.

Legal Information

PicoGreen is a registered trademark of Life Technologies

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H334
• pcodes: P261 - P284 - P501
• Hazard Classifications: Resp. Sens. 1
• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• flash_point_f: Not applicable
• flash_point_c: Not applicable
• ppe: Eyeshields, Faceshields, Gloves, type ABEK (EN14387) respirator filter