COLLB-RO

Collagenase B

from Clostridium histolyticum

• UNSPSC Code: 12352204
• EG-Nummer: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54
• Biological source: Clostridium histolyticum
• Concentration: 0.5-2.5 mg/mL

Eigenschaften

• biological source: Clostridium histolyticum
• sterility: non-sterile
• form: lyophilized
• packaging: pkg of 100 mg (11088807001), pkg of 2.5 g (11088831001), pkg of 500 mg (11088815001)
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: 0.5-2.5 mg/mL
• optimum pH: 6.0-8.0
• application(s): sample preparation
• storage temp.: 2-8°C

Beschreibung

General description

Collagenase B wird mittels Filtration, Ammoniumsulfat-Fällung, Dialyse und Lyophilisierung aus Clostridium histolyticum-Kulturen hergestellt. Collagenase aus Clostridium histolyticum ist ein collagenolytisches Enzym. Sie tritt mit collagenartigen Substanzen in Wechselwirkung und ist verantwortlich für die Zersetzung von Collagen in kleine Peptide.[1] Sie findet breite Anwendung bei der Disaggregation zahlreicher Gewebetypen (z. B. Lunge, Herz, Muskel, Knochen, Fettgewebe, Leber, Niere, Knorpel, Brustdrüse, Plazenta, Blutgefäße, Gehirn, Tumore, Nabelschnur) und bei der Herstellung von Einzelzellsuspensionen zur Etablierung primärer Zellkultursysteme. Collagenase B wird empfohlen, wenn Ausbeute und Viabilität wichtig sind.

Application

Clostridium-Collagenase von Roche wird zur Präparation von Zellen aus vielen Gewebetypen verwendet, darunter Leberzellen, Fettzellen, Pankreasinselzellen, Epithelzellen, Muskelzellen, Endothelzellen usw. Es sollte jedoch bei jeder Enzymcharge empirisch ermittelt werden, ob sie für den Aufschluss eines bestimmten Gewebes geeignet ist.
Collagenase B wird zur Präparation von Zellen aus Maus-Aorten und Darmkrebsgewebe verwendet.[2][3]

Biochem/physiol Actions

Collagenase baut natives Collagen ab. Clostripain, trypsinähnliche Enzyme und neutrale Proteasen bauen ebenfalls andere Proteine ab.

Features and Benefits

Enzymaktivität:
Collagenaseaktivität: >0,15 Einheiten/mg (nach Wünsch) (+25 °C, 4-Phenyl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg als Substrat)
Kontaminierende Enzymaktivitäten: Trypsin, Clostripain und gesamtproteolytische Aktivität
Collagenase B hat eine normale bis hohe Collagenaseaktivität und eine überdurchschnittlich hohe Clostripainaktivität (üblicherweise >10 Einheiten/mg).

Inhibitoren:
Collagenase-Inhibitoren: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-Mercaptoethanol
Collagenase wird durch Serum nicht gehemmt.
Clostripain-Inhibitoren: TLCK
Trypsin-Inhibitoren: Aprotinin, Trypsin-Inhibitor (Eiklar, Sojabohnen), Serum

Preparation Note

Aktivator: Ca²⁺
Arbeitskonzentration: 0,5 bis 2,5 mg/ml
Lagerbedingungen (Arbeitslösung): -15 bis -25 °C
Roche empfiehlt, nur die Lyophilisatmenge zu rekonstituieren, die für die sofortige Anwendung benötigt wird. Die rekonstituierte Lösung kann bei -15 bis -25 °C bis zu einer Woche aufbewahrt werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden, da die Aktivität nach der Rekonstituierung abnimmt.

Rekonstituierung in jeder ausgeglichenen Salzlösung (z. B. HBSS)

Other Notes

Collagenase von Roche wird in Wünsch-Einheiten (1 μmol Produkt wird pro Minute bei +25 °C mit Wünsch-Substrat gebildet) getestet.
Die Collagenaseaktivität wird häufig in Mandl-Einheiten angegeben (1 μmol Leucin wird in 5 Stunden bei +37 °C aus Collagen freigesetzt).
Leider gibt es keinen gemeinsamen Umrechnungsfaktor für die beiden Einheiten der Aktivität, da die Mandl-Einheit teilweise von der Konzentration der kontaminierenden Proteasen im Collagenasepräparat abhängt, die eine undefinierbare Variable darstellt. Eine reinere Collagenasezubereitung ergäbe somit eine geringere spezifische Aktivität in Mandl-Einheiten als eine Rohzubereitung. Für Clostridium-Zubereitungen sind üblicherweise Umrechnungsfaktoren von ca. 1:1800 angegeben (z. B. enthielt eine bestimmte Charge Clostridium-Collagenase ca. 0,15 Wünsch-Einheiten/mg und 250 Mandl-Einheiten/mg).

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Sicherheitshinweise

• pictograms: GHS07,GHS08
• signalword: Danger
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Lagerklasse: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash
• hcodes: H315,H319,H334,H335