COHISC-RO

cOmplete^™-His-Tag-Aufreinigungssäule

Prepacked, ready-to-use chromatography column

• Synonym(e): suitable for protein purification, matrix Sepharose-CL 6B
• NACRES: NA.21
• UNSPSC Code: 41116133

Eigenschaften

• packaging: pkg of 5 x 1 mL (columns (06781543001)), pkg of 5 mL (column (06781535001))
• manufacturer/tradename: Roche
• parameter: 1,420 cm/hr max. flow rate
• technique(s): protein purification: suitable
• matrix: Sepharose-CL 6B
• capacity: ≥40 mg/mL, resin binding capacity
• compatibility:
  • for long term storage: 20% ethanol, pH 4.0 to pH 9.0
  • during chromatography: The resin is compatible with 10mM EDTA, 10mM DTT during the purification (1 hour incubation), 6M guanidinium-HCl, 8M urea, pH 2.0 to pH 14.0.
  • during cleaning: 4% SDS for complete His-Tag Purification Resin filled in columns, pre-charged with Ni2+ stored in 20% ethanol.
• storage temp.: 2-8°C

Beschreibung

General description

Die gebräuchlichste Methode bei der Affinitätsreinigung von Proteinen beinhaltet den Einbau einer Sequenz von 6 bis 14 Histidinen in das N- oder C-terminale Ende (oder sogar eine freiliegende Schleife) des Proteins. Solche Polyhistidin-Abschnitte binden stark an divalente Metallionen wie Nickel und Cobalt. Dieser Effekt kann zur Separation von Proteinen genutzt werden. Metallionen können mithilfe eines Chelators auf einer Matrix immobilisiert werden, wobei das Ion weiterhin mit dem Polyhistidin-Tag des Proteins interferieren kann. Wenn diese His-markierten Proteine durch eine Säule mit immobilisierten Metallionen geleitet werden, binden die Proteine über das Tag an die Säule. Nahezu alle unmarkierten Proteine laufen durch die Säule. Die Freisetzung des Proteins von der Säule erfolgt durch Elution entweder mit Imidazol, das mit dem Polyhistidin-Tag um die Bindung an die Säule konkurriert, oder durch Herabsetzung des pH-Werts, wodurch die Affinität des Tags für das Harz verringert wird. Obwohl dieses Verfahren allgemein für die Aufreinigung rekombinanter Proteine mit einem konstruierten Affinitäts-Tag eingesetzt wird, kann es auch für natürliche Proteine mit einer inhärenten Affinität für divalente Kationen genutzt werden.

Features and Benefits

cOmplete-His-Tag-Aufreinigungssäulen sind in 2 Größen erhältlich, welche mit cOmplete-His-Tag-Aufreinigungsharz vorgepackt sind. Das cOmplete-His-Tag-Aufreinigungsharz ist eine innovative leistungsstarke IMAC-Matrix (Immobilisierte Metall-Affinitätschromatographie) zur mühelosen Einzelschritt-Aufreinigung His-markierter Proteine aus Gesamtlysaten. Das proprietäre Nickel-Chelat-System von Roche gewährleistet außergewöhnliche Kompatibilität mit häufig verwendeten Reduktionsmitteln wie DTT, chelatisierenden Metallproteasehemmern wie EDTA und einer Vielzahl von Puffern und Salzen. Die große Auswahl an kompatiblen Inhaltsstoffen ermöglicht eine Optimierung von Puffern zur maximalen Stabilität und Löslichkeit von Proteinen.

Die cOmplete-His-Tag-Aufreinigungssäulen sind vollständig kompatibel mit standardmäßigen Aufreinigungssystemen wie beispielsweise ÄKTA (Cytiva).

• Verwenden Sie die für Ihr Protein am besten geeigneten Pufferbedingungen.

Schaffen Sie optimale Bedingungen für Ihr Protein und lassen Sie Ihre Entscheidung, ob Sie DTT, EDTA oder andere Puffersubstanzen verwenden, von Ihrem Protein und nicht von Ihrem Aufreinigungsharz bestimmen.

• Wiederholte Gewinnung von hochreinem Protein

Einzelschritt-Aufreinigung ohne erneute Harzbeladung.

• Schutz des Proteins vor toxischem Nickel

Reduzierte Proteinoxidation und -aggregation, die durch Nickel abgebende Harze verursacht werden.

• Sicheres und umweltfreundliches Arbeitsumfeld

Keine Handhabung von toxischem Nickel und komplette Eliminierung von Entsorgungskosten.

Packaging

• 06781535001 (5-mL-Säule; 1 Säule enthält 5 mL cOmplete-His-Tag-Aufreinigungsharz)
• 06781543001 (5 x 1-mL-Säulen; 5 Säulen enthalten 1 mL cOmplete-His-Tag-Aufreinigungsharz)

Other Notes

Empfohlener Volumenstrom: 5-mL-Säule (06 781 535 001): 2,5 bis 10 mL/min
1-mL-Säule (06 781 543 001): 0,5 bis 2,0 mL/min
Der Volumenstrom ist eine Funktion des Säulenquerschnitts.

Empfohlene Imidazolkonzentration für Lade-/Waschpuffer: Die unspezifische Bindung von Proteinen ohne ein His-Tag ist gering.
Verwenden Sie bis zu 5 mM Imidazol in Lade- und/oder Waschpuffern.
Verwenden Sie kein Imidazol, wenn Sie einen neuen Assay für die Aufreinigung von His-Tag-Proteinen mit cOmplete-His-Tag-Aufreinigungssäulen erstellen. Wenn zum Beispiel die Reinheit des His-Tag-Proteins nach diesem ersten Schritt verbessert werden muss, verwenden Sie Imidazol in einer Endkonzentration von maximal 5 mM in einem zweiten Schritt.

Empfohlene Imidazolkonzentration für die Elution: Bis zu 500 mM.
Bitte beachten Sie:
Im Gegensatz zu anderen Harzen auf dem Markt eluiert gebundenes His-markiertes Protein normalerweise aus cOmplete-His-Tag-Aufreinigungssäulen bei einer geringeren Imidazol-Konzentration (z. B. 25 bis 45 mM).

Bindungskapazität:
Die Bindungskapazität des Harzes an verschiedene Proteinarten kann je nach den Proteineigenschaften, beispielsweise der Proteingröße, variieren.
cOmplete-His-Tag-Aufreinigungssäulen binden mit hoher Spezifität an das Polyhistidin-markierte Protein. Daher kann die Bindungskinetik im Vergleich zu konventionellen Metallchelatmatrizen unterschiedlich erscheinen. cOmplete-His-Tag-Aufreinigungssäulen erzielen ihre volle Kapazität, wenn die Fließrate während des chromatographischen Aufreinigungsverfahrens reduziert und somit eine längere Zeit für die Bindung des Proteins an das Harz gewährt wird.

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Legal Information

cOmplete is a trademark of Roche

Sicherheitshinweise

• signalword: Warning
• Lagerklasse: 3 - Flammable liquids
• flash_point_f: 93.2 °F
• flash_point_c: 34 °C
• pictograms: GHS02,GHS07
• hcodes: H226,H319
• pcodes: P210 - P280 - P303 + P361 + P353 - P337 + P313 - P370 + P378 - P403 + P235
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Flam. Liq. 3
• wgk: WGK 3