MAB5290
Anti-Dopamin-D1A-Rezeptor-Antikörper, Klon SG2-D1a
clone SG2-D1a, Chemicon®, from mouse
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| Ihnen/SKU | Verfügbarkeit | Preis |
|---|
Über diesen Artikel
UNSPSC Code:
12352203
NACRES:
NA.41
eCl@ss:
32160702
Conjugate:
unconjugated
Clone:
SG2-D1a, monoclonal
Application:
IHC, WB
Citations:
17
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Unterstützung erhaltenbiological source
mouse
conjugate
unconjugated
antibody form
purified immunoglobulin
antibody product type
primary antibodies
clone
SG2-D1a, monoclonal
species reactivity
mouse, sheep, rat
should not react with
pig, rabbit, human, bovine, canine
manufacturer/tradename
Chemicon®
technique(s)
immunohistochemistry: suitable, western blot: suitable
isotype
IgG2b
NCBI accession no.
UniProt accession no.
shipped in
wet ice
target post-translational modification
unmodified
Gene Information
human ... DRD1(1812)
Immunogen
Rekombinanter D1A-Rezeptor der Ratte, Carboxyterminus.
Application
Anti-Dopamin-D1A-Rezeptor-Antikörper, Klon SG2-D1a weist Konzentrationen des Dopamin-D1A-Rezeptors nach, wurde publiziert und zur Verwendung in IH und WB validiert.
Forschungskategorie
Neurowissenschaft
Neurowissenschaft
Forschungsunterkategorie
Neurotransmitter & Rezeptoren
Neurotransmitter & Rezeptoren
Western Blot: 1:250–1:500 auf ungekochten Membranfraktionen aus Caudatus-Gewebe der Ratte. Eine Reaktivität wurde auch in präfrontalem Kortex und temporalen Kortex festgestellt. Eine identifizierte Bande zwischen 45 und 66 kDa wird erkannt (Luedtke, 1999).
Immunhistochemie: In 4 % PFA fixierte Vibratomschnitte, blockiert mit 3 % NGS, 1 % BSA mit 0,2 % Triton X-100. Nur in PBS mit überschüssigen Blockierungsreagenzien verdünnte Primärantikörper.
Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Anwender bestimmt werden.
VORGESCHLAGENES WESTERN-BLOT-PROTOKOLL
Lösungen
10X Transferpuffer 1 Liter
Tris 115,3 g
Glycin 24,2 g
[SDS 4 g (kann weggelassen werden)]
Für eine 1X-Arbeitslösung: 1 Liter
mischen mit 700 ml Wasser
200 ml MeOH
100 ml 10X Transfer-TBST
Stammlösung 1 Liter
1 mol/l Tris pH-Wert 7,5 10 ml
5 mol/l NaCl 30 ml
10 % Tween-20 5 ml
1. SDS-PAGE-Gel wie gewünscht laufen lassen.
2. PVDF-Membran (ImmobilonP von Millipore) 1–2 Minuten in 100%igem Methanol eintauchen, um die Membran zu benetzen.
3. Membran in Transferpuffer (siehe nachstehend) eintauchen, bis sie für das Einrichten des Blot-Transfers bereit ist (>15 min).
4. Geltransfer-Sandwich mit dem Blot zur positiven Elektrode einrichten.
5. Protein vom Gel auf die Membran übertragen, bei 100 Volt 1–2 Stunden für Proteine mit niedrigen Molekülmassen oder 65 mA für 16 Stunden (über Nacht) für einen vollständigen Transfer von Proteinen mit höherer Molekülmasse.
6. Die übertragenen Banden mit Chemicon BLOT-FastStain
7. Mit entionisiertem Wasser entfärben.
8. Mit 5 % fettfreier Milch (Marvel oder Carnation) in TBS oder PBS über Nacht bei 4 °C blockieren. Die fettfreie Milch sollte frisch gelöst, bei 10.000 U/min für 10 min zentrifugiert und durch einen Glasfilter (Gelman Acrodisc) filtriert werden.
9. Inkubieren mit dem ersten Antikörper über Nacht bei sanftem Rühren und 4 °C.
Optimale Arbeitsverdünnungen und Inkubationszeit müssen vom Anwender bestimmt werden.
10. Mindestens 3 x 5 min mit TBST waschen. Ab diesem Schritt sollte Azid weggelassen werden.
11. Inkubieren mit dem Sekundärantikörper (an HRP konjugierter Anti-Maus-Antikörper der Ziege, z. B. Chemicon Katalognr. AP124P, geeignet verdünnt) für 1 Std. bei Raumtemperatur.
12. Mindestens 3 x 5 min mit TBST waschen.
13. ECL mit einem im Handel erhältlichen Kit (femtoLUCENT, Chemicon Katalognr. 2078) durchführen.
Immunhistochemie: In 4 % PFA fixierte Vibratomschnitte, blockiert mit 3 % NGS, 1 % BSA mit 0,2 % Triton X-100. Nur in PBS mit überschüssigen Blockierungsreagenzien verdünnte Primärantikörper.
Optimale Arbeitsverdünnungen müssen vom Anwender bestimmt werden.
VORGESCHLAGENES WESTERN-BLOT-PROTOKOLL
Lösungen
10X Transferpuffer 1 Liter
Tris 115,3 g
Glycin 24,2 g
[SDS 4 g (kann weggelassen werden)]
Für eine 1X-Arbeitslösung: 1 Liter
mischen mit 700 ml Wasser
200 ml MeOH
100 ml 10X Transfer-TBST
Stammlösung 1 Liter
1 mol/l Tris pH-Wert 7,5 10 ml
5 mol/l NaCl 30 ml
10 % Tween-20 5 ml
1. SDS-PAGE-Gel wie gewünscht laufen lassen.
2. PVDF-Membran (ImmobilonP von Millipore) 1–2 Minuten in 100%igem Methanol eintauchen, um die Membran zu benetzen.
3. Membran in Transferpuffer (siehe nachstehend) eintauchen, bis sie für das Einrichten des Blot-Transfers bereit ist (>15 min).
4. Geltransfer-Sandwich mit dem Blot zur positiven Elektrode einrichten.
5. Protein vom Gel auf die Membran übertragen, bei 100 Volt 1–2 Stunden für Proteine mit niedrigen Molekülmassen oder 65 mA für 16 Stunden (über Nacht) für einen vollständigen Transfer von Proteinen mit höherer Molekülmasse.
6. Die übertragenen Banden mit Chemicon BLOT-FastStain
7. Mit entionisiertem Wasser entfärben.
8. Mit 5 % fettfreier Milch (Marvel oder Carnation) in TBS oder PBS über Nacht bei 4 °C blockieren. Die fettfreie Milch sollte frisch gelöst, bei 10.000 U/min für 10 min zentrifugiert und durch einen Glasfilter (Gelman Acrodisc) filtriert werden.
9. Inkubieren mit dem ersten Antikörper über Nacht bei sanftem Rühren und 4 °C.
Optimale Arbeitsverdünnungen und Inkubationszeit müssen vom Anwender bestimmt werden.
10. Mindestens 3 x 5 min mit TBST waschen. Ab diesem Schritt sollte Azid weggelassen werden.
11. Inkubieren mit dem Sekundärantikörper (an HRP konjugierter Anti-Maus-Antikörper der Ziege, z. B. Chemicon Katalognr. AP124P, geeignet verdünnt) für 1 Std. bei Raumtemperatur.
12. Mindestens 3 x 5 min mit TBST waschen.
13. ECL mit einem im Handel erhältlichen Kit (femtoLUCENT, Chemicon Katalognr. 2078) durchführen.
Biochem/physiol Actions
Dopaminrezeptor D1A, keine Kreuzreaktivität mit D1B(D5)-Rezeptor. Die Immunreaktivität ist spezifisch für den D1A-Rezeptor von Maus und Ratte. Proben von Mensch, Schwein, Hund, Kaninchen, Schaf und Rind waren in der Western-Analyse nicht reaktiv.
Physical form
Aufgereinigtes Immunglobulin. Flüssigkeit in 0,02 mol/l Phosphatpuffer, 0,25 mol/l NaCl, pH-Wert 7,6, mit 0,1 % Natriumazid.
Format: Aufgereinigt
Preparation Note
Bei 2–8 °C in unverdünnten Aliquoten ab Empfangsdatum bis zu 6 Monate haltbar.
Other Notes
Konzentration: Die chargenspezifische Konzentration entnehmen Sie bitte dem Analysenzertifikat.
Legal Information
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Disclaimer
Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle Verwendung, zur In-vitro-Diagnostik, für Ex-vivo- oder In-vivo-Therapiezwecke oder jegliche Art der Einnahme oder Anwendung bei Menschen oder Tieren.
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