MAB19562

Anti-Laminin-5-(γ2-Kette-)Antikörper, Klon D4B5

clone D4B5, Chemicon^®, from mouse

• Synonym(e): Laminin 5
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Conjugate: unconjugated
• Clone: D4B5, monoclonal
• Application: ELISA, IHC, WB
• Citations: 71

Eigenschaften

• biological source: mouse
• Quality Segment: 100
• conjugate: unconjugated
• antibody form: purified immunoglobulin
• antibody product type: primary antibodies
• clone: D4B5, monoclonal
• species reactivity: human
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): ELISA: suitable, immunohistochemistry: suitable (paraffin), western blot: suitable
• isotype: IgG1
• NCBI accession no.: NM_005562.2, NM_018891.2
• UniProt accession no.: Q13753
• shipped in: wet ice
• target post-translational modification: unmodified
• Gene Information: human ... LAMC2(3918)

Beschreibung

General description

150 kDa (Vorläuferform) und 105 kDa (reife Form)

Laminine sind Glykoproteine der Basalmembran und ein Bestandteil der extrazellulären Matrix, die sich aus heterotrimerischen Alpha-, Beta- und Gammaketten zusammensetzen. Verschiedene Kombinationen der fünf Alpha-Ketten, drei Beta-Ketten und zwei Gamma-Ketten bilden mindestens 12 Laminin-Isoformen. Laminin-5 (Ln5) besteht aus den Alpha3-, Beta3- und Gamma2-Lamininketten und ist ein hochkonservierter Bestandteil von Ankerfilamenten, auf denen die Hemidesmosomstruktur der Epidermiskeratinozyten beruht. Mutationen oder Deletionen in den LN5-Genen (LAMA3, LAMB3, and LAMC2) werden mit Epidermolysis bullosa in Verbindung gebracht, einer letalen blasenbildenden Hauterkrankung. LN5 kann die dermoepidermale Junktionszone der Haut durch Bindung mit den Integrinen Alpha3/Beta1, Alpha6/Beta4 und Kollagen Typ VII stabilisieren und spielt eine wesentliche Rolle bei der Verankerung und Fortbewegung einer Vielzahl unterschiedlicher Zelltypen, darunter Epithelzellen, Fibroblasten, Neuronen und Leukozyten. Im Vergleich mit Fibronektin, Kollagen oder Vitronektin haften Zellen aus dem Epithel schneller an Laminin-5 an und verbreiten sich stärker. Laminin-5 hat vor Kurzem Aufmerksamkeit als Substrat für Karzinomzellen gewonnen, das zur Migration stimulieren könnte, da es bei verschiedenen Arten menschlicher Karzinome am Leitsaum invasiven Karzinomgewebes entdeckt wurde (Niki et al., 2002, Lohi et al., 2001).

Immunogen

Aminosäurerückstände 382–608 der humanen Laminin-5 Gamma2-Kette (III-Domäne), ausgedrückt als GST-Fusionsprotein

Application

Der Anti-Laminin-5-Antikörper (γ2-Kette), Klon D4B5, ist ein Antikörper gegen Laminin-5 (γ2-Kette) zur Verwendung in ELISA, IH(P) & WB.

Forschungskategorie
Zellstruktur

Forschungsunterkategorie
EZM-Proteine

Western Blot: Es werden 5 ug/mL empfohlen; Antikörper ausschließlich in PBS oder TBS verdünnen, nicht in Blockierlösungen; Blockieren mit aufgereinigten Verbindungen wird empfohlen.

Immunhistochemie von Paraffinschnitten: Es werden 5–10 ug/mL empfohlen. Nicht zu stark fixieren. Am besten ist 4-prozentiges oder 2-prozentiges PFA geeignet. 4 mm starke Paraffinschnitte werden entwachst, rehydriert und zur Inaktivierung der intrinsischen Peroxidase in 0,3 % wasserstoffperoxidhaltiges Methanol getaucht. Anschließend werden sie 15 Minuten bei Raumtemperatur mit Protease XXIV (Sigma) behandelt (0,01–0,05 %). Kein Trypsin verwenden. Antikörperinkubation bei 37° C für 1 Stunde, gefolgt von einem sekundären Antikörpernachweis und Visualisierung mit DAB (Mizushima et al., 1998). Den monoklonalen Antikörper nicht in Serumblockierer geben, da Serum Laminin-5 enthält, das an den Antikörper bindet und ihn beeinflusst. Stattdessen BSA oder andere entsprechende Medien verwenden.

Stark positive Färbung ist in der Basalmembran folgender Gewebe zu beobachten: Haut, Speiseröhre, Lunge und Niere. Positive Färbung zeigt sich auch bei Magen, Dünndarm, Milz, Thymus, Prostata und Eierstöcken. Schilddrüse, Hoden, Skelett- und Herzmuskeln zeigen eine negative LN5-Färbung.

Hemmung der Bindung zwischen Alpha2-Beta1-Integrin und Laminin-5 (40 ug/mL) (Decline & Rousselle, 2000).

Optimale Arbeitsverdünnungen für ELISA müssen vom Anwender bestimmt werden.

Biochem/physiol Actions

Der monoklonale Antikörper MAB19562 wurde entwickelt gegen Aminosäurerückstände 382-608 der humanen Laminin-5 Gamma2-Kette (III-Domäne), ausgedrückt als GST-Fusionsprotein. Der Antikörper erkennt die Kettenproteine 150 (Vorläuferform) and 105 kDa (reife Form) im Laminin-5. Es ist keine Reaktivität mit anderen Laminin-Typen zu erwarten, da die Laminin-Gamma-2-Kette für Laminin-5 spezifisch ist.

Physical form

Aufgereinigtes Protein A

Aufgereinigtes Protein A Immunglobulin der Maus in 20 mM Natriumphosphat, 250 mM NaCl, pH. 7,6; mit 0,1 % Natriumazid als Konservierungsmittel.

Format: Aufgereinigt

Preparation Note

Bei 2–8° C ab Versanddatum 1 Jahr haltbar. Aliquotieren, um wiederholtes Einfrieren und Auftauen zu vermeiden. Für maximale Produktrückgewinnung das Originalfläschchen nach dem Auftauen und vor dem Abnehmen der Kappe zentrifugieren.

Analysis Note

Kontrolle
Menschliches Pankreastumorgewebe, menschliches Brustkrebsgewebe oder Ganzzelllysat von A-431-Zellen

Mittels Western-Blot an rekombinantem Laminin-5 beurteilt.

Western-Blot-Analyse: In einer 1:500–1:2000 Verdünnung dieses Antikörpers wurden Laminin-5 Gamma2-Ketten in 10 µg humanem rekombinantem Laminin-5 nachgewiesen.

Other Notes

Konzentration: Die chargenspezifische Konzentration entnehmen Sie bitte dem Analysenzertifikat.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

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• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 2