ECM557

QCM Leukozytentransendothel-Migrations-Assay (kolorimetrisch, 24 Assays)

• UNSPSC Code: 12352207
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32161000

Eigenschaften

• Quality Segment: 100
• manufacturer/tradename: Chemicon^®, QCM
• technique(s): cell based assay: suitable
• detection method: colorimetric

Beschreibung

General description

Der kolorimetrische QCM Leukozytentransendothel-Zellmigrations-Assay von Millipore stellt ein effizientes Modell zum Analysieren der Fähigkeit von Leukozyten, durch das Endothel zu migrieren dar. Der Assay ist mit einem 3-μm-Porengröße-Zellkultureinsatz, der sich für die meisten Leukozytenmigrationen eignet, konzipiert. Die Oberseite des Zellkultureinsatzes ist mit Fibronektin beschichtet, um die optimale Anhaftung und das Wachstum von Endothelzellen zu fördern. Der Assay ermöglicht es Forschenden, die Wirkung verschiedener Faktoren, die den transendothelialen Prozess beeinflussen, zu beurteilen.

Vorbeschichtete Zellkultureinsätze werden mit dem Millipore QCM Leukozytentransendothel-Zellmigrations-Assay bereitgestellt, um die Assay-Dauer signifikant zu verkürzen. Zusätzlich ermöglicht der Assay die quantitative Analyse der Leukozytenmigration. Nach der Inkubation von Leukozyten mit der Endothelzellschicht werden migrierende Zellen mit WST-1-Reagens gefärbt und quantifiziert sowie mit einem Spektrophotometer gemessen. Die Absorption korreliert mit der Zellmigration.

Leukozyten bewachen das Gefäßsystem. Sie müssen durch Endothelbarrieren migrieren, um an Entzündungsstellen zu kommen. Dieser Prozess involviert eine mehrstufige Kaskade aus Leukozyten-Rolling, -anhaftung und -transmigration. Ein quantitativer Assay für die Leukozytentransendothelmigration wurde mit einem modifizierten Boyden-Kammer-System beschrieben (Roth et al. 1995, Ding et al. 2000). Das Boyden-Kammer-System ist ein Zwei-Kammern-System mit einer porösen Membran, die eine Grenzfläche zwischen diesen beiden Kammern darstellt. Endothelzellen werden auf der porösen Membran kultiviert, die mit einem Protein der extrazellulären Matrix (EZM) beschichtet ist. Sobald sich eine konfluente Schicht dieser Zellen etabliert hat, werden die Leukozyten auf die Endothelmonoschicht gegeben. Die Leukozytenmigration durch das Endothel wird durch das Messen der Anzahl von Zellen bestimmt, die zwischen den Endothelzellen durch die poröse Membran und in die untere Kammer migrieren.

Application

Assay-Ergebnisse können mit einem Balkendiagramm grafisch veranschaulicht werden, um Werte für die optische Dichte (OD) bei 420–480 nm darzustellen.

Eine zusätzliche Migration kann in Test-Wells durch die Zugabe von Zytokinen oder anderen Wirkstoffen eingeleitet oder gehemmt werden.
Abbildungen 2 und 3 zeigen typische Migrationsergebnisse. Die Daten sollen nur als Referenz dienen. Diese Daten sollten nicht verwendet werden, um tatsächliche Assay-Ergebnisse zu interpretieren.

Dieser kolorimetrische QCM Leukozytentransendothel-Zellmigrations-Assay stellt ein effizientes Modell zum Analysieren der Fähigkeit von Leukozyten, durch das Endothel zu migrieren dar.

Forschungskategorie
Zellstruktur

Packaging

24 Assays

Preparation Note

Dieses Kit ist in zwei separaten Boxen verpackt. ECM557-1 enthält Komponenten, die ab Erhalt bei 2 bis 8 °C gelagert werden sollen. ECM557-2 enthält TNFα, WST-1 und Electro-Coupling-Lösung, die ab Erhalt bei -20 °C gelagert werden sollen. Bitte beziehen Sie sich auf

Other Notes

1. Migrationstestplatte: (Artikelnr. CS202626) Zwei 24-Well-Kulturplatten mit jeweils 12 mit humanem Fibronektin beschichteten Zellkultureinsätzen (3 μm Porengröße), ausreichend für die Bewertung von 24 Prüfproben
2 TNFα: (Artikelnr. 2004167) Ein Röhrchen – 20 μl zu 0,1 mg/ml
3. Zellfärbelösung: (Artikelnr. 20294) Ein Fläschchen – 10 ml
4. WST-1-Reagens: (Artikelnr. CS201370) Ein Fläschchen.
5. Electro-Coupling-Lösung: (Artikelnr. CS201382) Ein Fläschchen – 5 ml.
6. 96-Well-Farbquantifizierungsplatte: (Artikelnr. 2005870) Eine Platte.
7. Pinzette: (Artikelnr. 10203) 1 Stück

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Sofern in unserem Katalog oder anderen Begleitdokumenten unserer Produkte nicht anders angegeben, sind unsere Produkte nur für Forschungszwecke vorgesehen und nicht für andere Zwecke zu verwenden, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf unautorisierte kommerzielle

Sicherheitshinweise

• Lagerklasse: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 3