RPROTK-RO

Proteinasa K recombinante, calidad PCR

Lyophilizate from Pichia pastoris

• Número CE: 3.4.23.1 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.21
• UNSPSC Code: 12352204
• Specific activity: ~2 units/mg protein

Propiedades

• form: lyophilized
• specific activity: ~2 units/mg protein
• packaging: pkg of 100 mg (03115879001), pkg of 25 mg (03115836001), pkg of 2 × 250 mg (03115801001), pkg of 4 × 250 mg (03115852001)
• manufacturer/tradename: Roche
• pH range: 4.0-12.5
• storage temp.: 2-8°C

Descripción

General description

Aproximadamente 2,0 U/mg de liofilizado (2,5 U/mg de proteína) cuando se analiza con el ensayo de cromozima (equivalente a 24 U/mg de liofilizado [30 U/mg de proteína] con el ensayo de hemoglobina).

La proteinasa K es una serín proteasa relacionada con la subtilisina.[1] La enzima recombinante es idéntica a la proteasa nativa originalmente aislada del hongo Tritirachium album. Las especificaciones de la enzima recombinante son las mismas que las de la proteasa nativa. La secuencia de aminoácidos (peso molecular) y la estructura molecular son idénticas. Sin embargo, la preparación recombinante es mucho más pura que la enzima nativa, ya que carece de ADN que no tiene una especificidad de rotura pronunciada. La enzima es extremadamente eficaz en proteínas nativas y, por tanto, puede utilizarse para inactivar rápidamente las nucleasas endógenas como las ARNasas y las ADNasas. La enzima está disponible también en disolución.

• Inhibidores: La enzima es inactivada por Pefabloc^® SC. Sin embargo, no es inactivada por iones metálicos, agentes quelantes (como el EDTA), reactivos sulfhidrilo o inhibidores de la tripsina y la quimiotripsina.
• Activadores: La actividad proteinasa K es estimulada por la presencia de agentes desnaturalizants (SDS y urea).
• pH óptimo: La proteinasa K es estable en un amplio intervalo de pH (4 – 12,5). La enzima mantiene actividad completa durante varias horas cuando se incuba a un pH comprendido entre 6,5 y 9,5.
• Volumen de actividad:

Aproximadamente 2,5 U/mg de liofilizado (ensayo de cromozima)
Aproximadamente 30 U/mg de liofilizado (ensayo de hemoglobina)

Nota: El SDS puede aumentar la actividad de la proteinasa K hasta siete veces.

Application

La proteinasa K es es una de las endopeptidasas más activas conocidas. Esta proteinasa K de calidad para PCR es particularmente adecuada para el aislamiento de ácidos nucleicos para reacciones de amplificación. Además:

• La enzima es extremadamente eficaz en proteínas nativas y, por tanto, puede utilizarse para inactivar rápidamente las nucleasas endógenas como las ARNasas y las ADNasas durante el aislamiento de los ácidos nucleicos. Esta propiedad hace que la proteinasa K sea particularmente adecuada para el aislamiento de ARN y ADN nativos de tejidos y líneas celulares.[2][3]
• La enzima promueve la lisis celular al activar un factor autolítico bacteriano.
• La proteinasa K se utiliza para el análisis de las estructuras membranales al modificar las proteínas y las glucoproteínas de las superficies celulares.
• Dado que se comprueba la ausencia de ARNasas y de ADNasas de la enzima, y que prácticamente está exenta de ADN, es especialmente adecuada para aislar las plantillas para la PCR y la RT-PCR.
• La proteinasa K puede utilizarse también para eliminar los restos durante la preparación de la transferencia de colonias y para tratar cortes de tejidos con el objetivo de asegurar la infiltración eficiente de la sonda durante la hibridación in situ.

Biochem/physiol Actions

La proteinasa K es una de las endopeptidasas más activas conocidas y no exhibe especificidad de corte pronunciada. La proteinasa K rompe las proteínas como sigue: X-↓-Y, donde X = un aminoácidos alifático, aromático o hidrófobo e Y = cualquier aminoácido. La enzima puede romper el material proteico en aminoácidos libres cuando se utiliza en gran exceso y durante largos periodo de incubación.

Features and Benefits

La proteinasa K es una serín proteasa que no tiene una especificidad de rotura pronunciada. Rompe las proteínas entres los aminoácidos X e Y (X-↓-Y) cuando X = un aminoácidos alifático, aromático o hidrófobo e Y = cualquier aminoácido. La enzima es extremadamente eficaz en proteínas nativas y, por tanto, puede utilizarse para inactivar rápidamente las nucleasas endógenas como las ARNasas y las ADNasas.

• Elija una herramienta efectiva para la preparación de la muestra. Inactiva las ADNasas y las ARNasas de muchas especies.
• Cuente con una calidad y un rendimiento constantes. Estrictas pruebas de calidad aseguran una estabilidad óptima y un elevado rendimiento entre lotes.
• Prepare muestras en un amplio espectro de condiciones. La robusta enzima es estable a lo largo de un amplio espectro de pH y es ideal para diversas aplicaciones.
• Aproveche una enzima carente de contaminación. Se ha probado la ausencia de ARNasas y ADNasas en la enzima, y está prácticamente exenta de ADN. Es especialmente adecuada para el aislamiento de muestras para PCR.

Nota: La enzima puede reducir las proteínas a aminoácidos libres si se encuentra en gran exceso durante largos periodo de incubación.

Contenido
La proteinasa K de calidad para PCR liofilizada también está disponible en disolución.

Preparation Note

Activador: Para estimular la actividad proteinasa K, añada desnaturalizantes (SDS y urea). Por ejemplo, el SDS aumenta la actividad de la proteinasa K hasta siete veces en comparación con la actividad exhibida en ausencia de SDS.
Disolución de trabajo: Para obtener mejores resultados, disuelva proteinasa K recombinante, de calidad para PCR, en agua bidestilada o en tampón Tris. La mejor disolución tampón para la proteinasa K variará de una aplicación a otra. Siga siempre las directrices de pH y temperatura del campo parámetros. Como norma general, la proteinasa K es estable y muy activa en tampones que contienen reactivos desnaturalizantes como la urea, el dodecilsulfatosódico (SDS) y las sales de guanidina.
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): entre -15 y -25 °C

Reconstitución en agua bidestilada como mínimo hasta 20 mg/ml

Analysis Note

Esta preparación carece de ARNasas, ADNasas y ADN, de acuerdo con los procedimientos de control de calidad vigentes.

• Ausencia de nucleasas: Cada lote se analiza en varios sustratos para asegurar la ausencia de actividad endonucleasa, exonucleasa, ribonucleasa y melladora.
• Contenida de ADN: = 10 pg/mg enzima (determinada por el Umbral)
• Grado de contaminación microbiológica: <125 ufc/g (determinados mediante la prueba más estricta de la Farmacopa Europea, que permite identificar el número total de bacterias aerobias viables, levaduras y hongos)

Other Notes

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.
La proteinasa K de calidad para PCR liofilizada también está disponible en disolución.

Legal Information

Pefabloc is a registered trademark of Pentapharm

Información de seguridad

• pictograms: GHS07,GHS08
• signalword: Danger
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - Skin Sens. 1 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Clase de almacenamiento: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash
• hcodes: H315,H317,H319,H334,H335