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48-623MAG

Millipore

Kit MILLIPLEX® Fosfo/Total STAT3 microesferas magnéticas 2-Plex - Ensayo múltiple de comunicación celular

Sinónimos:

Kit 2-Plex fosfo/total Kit, Kit de microesferas STAT3, Kit de señalización celular STAT3

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About This Item

Código UNSPSC:
12161503
NACRES:
NA.47
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reactividad de especies

human, mouse

Nivel de calidad

200

fabricante / nombre comercial

Milliplex®

técnicas

multiplexing: suitable

método de detección

fluorometric (Luminex® xMAP®)

temp. de almacenamiento

2-8°C

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Descripción general

Los STAT (transductores de señal y activadores de la transcripción) son utilizados por los receptores para una amplia variedad de ligandos, como las citocinas, las hormonas, los factores de crecimiento y los neurotransmisores. La fosforilación de las proteínas STAT en los residuos conservados de tirosina activa la dimerización mediada por SH2 seguida rápidamente de la translocación nuclear. Los dímeros de STAT se unen a los elementos IRE (elemento de respuesta a interferón) y GAS (secuencia activada por interferón gamma) del ADN, lo que provoca la regulación transcripcional de los genes consecutivos. Las vías STAT desempeñan un papel importante en la oncogénesis, la progresión tumoral, la angiogénesis, la motilidad celular, las respuestas inmunitarias y la diferenciación de las células madre.La fosforilación de proteínas representa el mecanismo principal utilizado en la regulación de las funciones celulares en todas las células eucariotas. La fosforilación anómala se ha implicada en el inicio y desarrollo de muchas enfermedades como los trastornos metabólicos, las enfermedades inflamatorias o el cáncer, entre otras. Los cambios en la fosforilación de las proteínas pueden atribuirse tanto a cambios en los eventos de fosforilación como a cambios debidos a los niveles totales de proteínas. Para distinguir los cambios en la fosforilación de los cambios en la expresión de proteínas, es importante normalizar la señal procedente de la fosforilación sobre la señal procedente de la proteína total. Con este fin, se ha desarrollado el kit MILLIPLEX® MAP 2-plex Fosfo/Total STAT3 (ref. 48-623MAG) para la detección simultánea del STAT3 fosforilado (Tyr705) y el STAT3 total en un solo pocillo utilizando el sistema Luminex.

Especificidad

La reactividad cruzada entre los anticuerpos y cualquiera de los otros analitos de este kit es indetectable o insignificante.

Aplicación

Los ensayos múltiples intracelulares basados en microesferas que utilizan la tecnología Luminex permiten la cuantificación relativa simultánea de la fosforilación múltiple o las proteínas de la vía total en muestras de lisado de tejido y celular. Los analitos disponibles para este kit múltiple son: STAT3 (total), STAT3 (Tyr705).Se trata de un ensayo de incubación durante la noche (4°C).Este kit debe procesarse utilizando el tampón de ensayo suministrado.Este ensayo requiere 25 μl de lisado celular filtrado diluido por pocillo.El intervalo de concentración proteica de trabajo sugerido para el ensayo es de 1 a 25 μg de proteína total/pocillo (de 25 μl/pocillo a 40 - 1 000 μg/ml).Analitos disponibles:STAT3 (total)STAT3 (Tyr705)

Envase

Placa de 96 pocillos

Información legal

Luminex is a registered trademark of Luminex Corp
MILLIPLEX is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
xMAP is a registered trademark of Luminex Corp

Cláusula de descargo de responsabilidad

Salvo que se indique lo contrario en nuestro catálogo o en otra documentación de la empresa que acompañe al producto, nuestros productos están indicados sólo para investigación y no deben utilizarse para ningún otro propósito, como, entre otros, usos comerciales no autorizados, diagnóstico in vitro, usos terapéuticos ex vivo o in vivo o cualquier tipo de consumo o aplicación en humanos o animales.

Palabra de señalización

Danger

Frases de peligro

H302,H315,H318,H410

Clasificaciones de peligro

Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Acute 1 - Aquatic Chronic 2 - Eye Dam. 1 - Skin Irrit. 2

Código de clase de almacenamiento

10 - Combustible liquids

Certificados de análisis (COA)

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Cell Signaling Multiplex Assays | MILLIPLEX® Assays

Uncover how cells communicate with MILLIPLEX® cell signaling multiplex assays. Multiplexing with cell signaling phosphoprotein assays based on Luminex® xMAP® technology helps researchers measure phosphoproteins and total proteins within the same or different pathways from a single sample.

Questions

  1. Do you have a protocol for sample preparation to run PBMCs in the Milliplex Cell Signaling assays?

    1 answer

    1. The protocol for sample preparation in the Milliplex Cell Signaling assays has been developed by the R&D team specifically for a custom assay. It is important to note that this protocol has not been tested in all Cell Signaling panels, so volumes and concentrations may need to be optimized for individual studies.

      Here is a short protocol for PBMC cell lysis:
      1. If PBMC cells are frozen, it is recommended to allow cells to recover for 24 hours in complete media as less than 24 hours of recovery can lead to a decrease in signal.
      2. After 24 hours of recovery, count the cells using an appropriate cell counter.
      3. Pellet the PBMC cells at 1000 x g using a tabletop centrifuge for 5 minutes at room temperature.
      4. Remove the supernatant and wash the cells with PBS.
      5. Pellet the PBMC cells again at 1000 x g using a tabletop centrifuge for 5 minutes at room temperature.
      6. Add 10uL of Lysis Buffer (with 2x concentrated protease inhibitors added just prior to use) per 1-2 million cells.
      7. Gently vortex for 30 seconds before transferring the cell lysate into a centrifuge tube.
      8. Gently rock the cell lysate for 10 minutes at 4°C.
      9. Pellet unbroken cells and organelles at 12,000 x g for 10 minutes at 4°C.
      10. Transfer the clear supernatant into a new centrifuge tube.
      11. It is recommended, at least for the first time, to determine the total protein concentration. If not, then it is recommended to run a lysate titration starting at 10uL sample + 15uL of Assay Buffer 1 and performing a 1:1 serial dilution in Assay Buffer 1.

      For the Custom assay, the optimal total protein concentration was found to be 2 to 6 mg/mL. Additionally, it was determined that 10uL of Lysis Buffer per 1 million PBMC cells yields approximately 2 mg/mL, and adding 10uL of this 2mg/mL sample plus 15uL of Assay Buffer yielded good results. It is advised not to dilute samples in Lysis Buffer; rather, dilute in Assay Buffer 1, which lacks strong detergents. If needed, the amount of Lysis Buffer per PBMC cells can be adjusted, for example, by increasing it to 10uL of Lysis Buffer per 2 million PBMC cells.

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