(ELISA) Saggio di immunoadsorbimento enzimatico
Tipicamente condotti in piastre da microtitolazione, i saggi ELISA vengono comunemente usati in biologia molecolare per la rivelazione e quantificazione di vari tipi di molecole fra cui peptidi, proteine e anticorpi. Questi saggi sono in grado di rivelare le molecole di interesse a livello di pg/mL e sono fondamentali per applicazioni sia di ricerca di base che di ricerca in campo medico
Saggi ELISA: interazioni antigene-anticorpo
I componenti molecolari fondamentali di un saggio ELISA includono tipicamente un anticorpo coniugato con un enzima, una molecola di interesse immobilizzata e un substrato di rivelazione. Un aspetto critico nel determinare il successo di un saggio ELISA e la qualità dei dati ottenuti è dato dall’affinità e dalla specificità delle interazioni antigene-anticorpo. Le interazioni antigene-anticorpo sono influenzate da numerosi fattori, inclusi pH, temperatura e forza ionica.
Metodi di rivelazione nei saggi ELISA
I metodi ELISA diretti prevedono un antigene immobilizzato, legato alla superficie di una piastra direttamente o indirettamente tramite un anticorpo di cattura, seguito da un anticorpo primario specifico per l’antigene e coniugato con un enzima e, infine, dal substrato di rivelazione. Il metodo di rivelazione indiretto più comunemente impiegato comprende sia un anticorpo primario non coniugato che un anticorpo secondario coniugato, specifico per la rivelazione dell’anticorpo primario. La rivelazione indiretta ha il vantaggio di una maggiore immunoreattività con l’antigene bersaglio perché l’enzima coniugato è presente solo sull’anticorpo secondario. Oltre ai metodi diretti e indiretti, l’ELISA a cattura (sandwich) fa uso di un ulteriore anticorpo cattura-antigene inizialmente attaccato alla superficie della micropiastra, seguito da due anticorpi, uno primario e uno secondario coniugato a un enzima con modalità simili al metodo indiretto precedentemente descritto.
Articoli tecnici correlati
- Learn about the Conferma® ELISA development and manufacturing methods that provide strong sample detection and long-term assay and lot consistency, giving you confidence in your research.
- The inherent immune ability of an animal can be leveraged to generate antibodies that bind to specific molecules.
- The enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot ) assay enables visualization of multiple secretory products from a single responding cell. The ELISpot provides both qualitative (type of immune protein) and quantitative (number of responding cells) information.
- Troubleshoot and optimize ELISAs using this guide that includes solutions to some of the most common sources of problems for assay development.
- Accelerate your time to market with fit-for-use products which offer the quality, consistency, and documentation necessary for every step of your IVD development and manufacturing needs.
- Visualizza tutto (18)
Protocolli correlati
- This article offers 4 popular ELISA protocols: Sandwich ELISA protocol, Phosphorylation Assay Procedure, EIA Assay Procedure, & Cell-based Assay Procedure.
- ELISA protocols providing detailed instructions on performing indirect ELISA and Capture ELISA . Learn more about recommended products and techniques for performing both sandwich ELISA and indirect ELISA experiments.
- Cell Proliferation ELISA, BrdU (colorimetric) Protocol & Troubleshooting
- Measure and compare the activity of proteases with this non-specific protease activity assay using casein. Use this assay as a standardized procedure to determine the activity of proteases for quality control.
- Protocol for the one-step, glutaraldehyde coupling method to conjugation alkaline phosphatase to antibodies and other proteins.
- Visualizza tutto (5)
Cerca altri articoli e protocolli
Per continuare a leggere, autenticati o crea un account.
Non hai un Account?