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  • Improved sensitivity of the nano ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric analysis of low-concentrated neuropeptides by reducing aspecific adsorption and optimizing the injection solvent.

Improved sensitivity of the nano ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric analysis of low-concentrated neuropeptides by reducing aspecific adsorption and optimizing the injection solvent.

Journal of chromatography. A (2014-08-26)
Katrien Maes, Joeri Van Liefferinge, Johan Viaene, Jolien Van Schoors, Yannick Van Wanseele, Guillaume Béchade, Erin E Chambers, Hugo Morren, Yvette Michotte, Yvan Vander Heyden, Jan Claereboudt, Ilse Smolders, Ann Van Eeckhaut
RESUMEN

Obtaining maximal sensitivity of nano UHPLC-MS/MS methods is primordial to quantify picomolar concentrations of neuropeptides in microdialysis samples. Since aspecific adsorption of peptides to Eppendorf tubes, pipette tips and UHPLC vials is detrimental for method sensitivity, a strategy is presented to reduce adsorption of these peptides during standard preparation. Within this respect, all procedural steps from dissolution of the lyophilized powder until the injection of the sample onto the system are investigated. Two peptides of the neuromedin family, i.e. neuromedin B and neuromedin N, and a neuromedin N-related neuropeptide, neurotensin, are evaluated. The first part of this study outlines a number of parameters which are known to affect peptide solubility. The main focus of the second part involves the optimization of the sample composition in the UHPLC vial by using design of experiments. Contradictory findings are observed concerning the influence of acetonitrile, salts and matrix components. They are found important for injection of the peptides into the system, but crucially need to be excluded from the dilution solvent. Furthermore, the type of surface material, temperature and the pipetting protocol considerably affect the adsorption phenomenon. Statistical analysis on the results of the central composite design reveals that the highest peptide responses are obtained with the injection solvent consisting of 13.1% V/V ACN and 4.4% V/V FA. This aspect of the optimization strategy can be identified as the main contributor to the gain in method sensitivity. Since the reduction of peptide adsorption and the optimization of the injection solvent resulted in a clear and quantifiable signal of the three peptides, optimization of both issues should be considered in the early stage of method development, in particular when the analysis of low-concentration peptide solutions is envisaged.

MATERIALES
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Sigma-Aldrich
Cloruro de potasio, ACS reagent, 99.0-100.5%
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Sigma-Aldrich
Cloruro de sodio, for molecular biology, DNase, RNase, and protease, none detected, ≥99% (titration)
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Sigma-Aldrich
Cloruro de potasio, puriss., meets analytical specification of Ph. Eur., BP, USP, FCC, E508, 99-100.5% (AT), ≤0.0001% Al
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Sigma-Aldrich
Sodium chloride solution, 0.9% in water, BioXtra, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Sodium chloride solution, 5 M in H2O, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Cloruro de potasio, for molecular biology, ≥99.0%
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Sigma-Aldrich
Cloruro de sodio, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Cloruro de potasio, powder, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, ≥99.0%
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Sigma-Aldrich
Cloruro de potasio, ReagentPlus®, ≥99.0%
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SAFC
Sodium chloride solution, 5 M
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Sigma-Aldrich
Cloruro de potasio solution, BioUltra, for molecular biology, ~1 M in H2O
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Cloruro de potasio, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ACS reagent, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Cloruro de sodio, JIS special grade, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
Cloruro de potasio, puriss. p.a., ≥99.5% (AT)
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Sigma-Aldrich
Sodium chloride solution, BioUltra, for molecular biology, ~5 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Cloruro de potasio, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (AT)
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Sigma-Aldrich
Cloruro de sodio, 99.999% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Cloruro de sodio, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (AT)
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Sigma-Aldrich
Calcium chloride hexahydrate, ≥95%
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Sigma-Aldrich
Cloruro de potasio, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ReagentPlus®, ≥99%
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Cloruro de potasio, 99.999% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Cloruro de sodio, SAJ first grade, ≥99.0%
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Calcium chloride hexahydrate, BioUltra, ≥98.0% (calc. based on dry substance, KT)
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Sigma-Aldrich
Cloruro de sodio, BioXtra, ≥99.5% (AT)
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Sigma-Aldrich
Cloruro de sodio, BioPerformance Certified, ≥99% (titration), suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture
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Sigma-Aldrich
Cloruro de sodio, AnhydroBeads, −10 mesh, 99.999% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Cloruro de potasio, ≥99.99% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Sodium chloride-35Cl, 99 atom % 35Cl
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Sigma-Aldrich
Cloruro de sodio, meets analytical specification of Ph. Eur., BP, USP, 99.0-100.5%
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Supelco
Potassium chloride solution, for Ag/AgCl electrodes, ~3 M KCl, saturated with silver chloride
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