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  • Mitofusin 2 in Macrophages Links Mitochondrial ROS Production, Cytokine Release, Phagocytosis, Autophagy, and Bactericidal Activity.

Mitofusin 2 in Macrophages Links Mitochondrial ROS Production, Cytokine Release, Phagocytosis, Autophagy, and Bactericidal Activity.

Cell reports (2020-08-28)
Juan Tur, Selma Pereira-Lopes, Tania Vico, Eros A Marín, Juan P Muñoz, Maribel Hernández-Alvarez, Pere-Joan Cardona, Antonio Zorzano, Jorge Lloberas, Antonio Celada
RESUMEN

Mitofusin 2 (Mfn2) plays a major role in mitochondrial fusion and in the maintenance of mitochondria-endoplasmic reticulum contact sites. Given that macrophages play a major role in inflammation, we studied the contribution of Mfn2 to the activity of these cells. Pro-inflammatory stimuli such as lipopolysaccharide (LPS) induced Mfn2 expression. The use of the Mfn2 and Mfn1 myeloid-conditional knockout (KO) mouse models reveals that Mfn2 but not Mfn1 is required for the adaptation of mitochondrial respiration to stress conditions and for the production of reactive oxygen species (ROS) upon pro-inflammatory activation. Mfn2 deficiency specifically impairs the production of pro-inflammatory cytokines and nitric oxide. In addition, the lack of Mfn2 but not Mfn1 is associated with dysfunctional autophagy, apoptosis, phagocytosis, and antigen processing. Mfn2floxed;CreLysM mice fail to be protected from Listeria, Mycobacterium tuberculosis, or LPS endotoxemia. These results reveal an unexpected contribution of Mfn2 to ROS production and inflammation in macrophages.

MATERIALES
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Sigma-Aldrich
TWEEN® 20, for molecular biology, viscous liquid
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Sigma-Aldrich
Persulfato de amonio, for molecular biology, suitable for electrophoresis, ≥98%
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Sigma-Aldrich
Antimycin A from Streptomyces sp.
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Sigma-Aldrich
Yoduro de propidio, ≥94.0% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Diacetato de 2′,7′-diclorofluoresceína, ≥97%
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Sigma-Aldrich
Oligomicina A, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Rotenone, ≥95%
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Sigma-Aldrich
Anti-α-tubulina monoclonal antibody produced in mouse, ascites fluid, clone B-5-1-2
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Sigma-Aldrich
Ribonucleasa A from bovine pancreas, for molecular biology, ≥70 Kunitz units/mg protein, lyophilized
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Sigma-Aldrich
Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone, ≥97% (TLC), powder
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Sigma-Aldrich
Cytochalasin D, from Zygosporium mansonii, ≥98% (TLC and HPLC), powder
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Sigma-Aldrich
Lipopolysaccharides from Escherichia coli O127:B8, purified by phenol extraction
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Sigma-Aldrich
Paraformaldehyde, powder, 95%
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Sigma-Aldrich
Anti-LC3 antibody produced in rabbit, ~1 mg/mL, affinity isolated antibody, buffered aqueous solution
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Sigma-Aldrich
DL-Cysteine, technical grade
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Sigma-Aldrich
L-arginina, reagent grade, ≥98%
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Millipore
Brain Heart Infusion Agar, suitable for microbiology, NutriSelect® Plus, For the cultivation of fastidious, pathogenic bacteria, yeasts, and molds
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Sigma-Aldrich
Amyloid Protein Non-Aβ Component, ≥80% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Anti-MKP1 Antibody, Upstate®, from rabbit
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Supelco
Timestrip PLUS 8 °C 48 hours
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