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Merck

Protein carbonyl determination by a rhodamine B hydrazide-based fluorometric assay.

Redox biology (2018-05-05)
Christos D Georgiou, Dimitrios Zisimopoulos, Vasiliki Argyropoulou, Electra Kalaitzopoulou, Panayiotis V Ioannou, George Salachas, Tilman Grune
RESUMEN

A new fluorometric assay is presented for the ultrasensitive quantification of total protein carbonyls, and is based on their specific reaction with rhodamine B hydrazide (RBH), and the production of a protein carbonyl-RBH hydrazone the fluorescence of which (at ex/em 560/585 nm) is greatly enhanced by guanidine-HCl. Compared to the fluorescein-5-thiosemicarbazide (FTC)-based fluorometric assay, the RBH assay uses a 24-fold shorter reaction incubation time (1 h) and at least 1000-fold lower protein quantity (2.5 µg), and produces very reliable data that were verified by extensive standardization experiments. The protein carbonyl group detection sensitivity limit of the RBH assay, based on its standard curve, can be as low as 0.4 pmol, and even lower. Counting the very low protein limit of the RBH assay, its cumulative and functional sensitivity is 8500- and 800-fold higher than the corresponding ones for the FTC assay. Neither heme proteins hemoglobin and cytochrome c nor DNA interfere with the RBH assay.

MATERIALES
Referencia del producto
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Descripción del producto

Sigma-Aldrich
Metanol, suitable for HPLC, ≥99.9%
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Sigma-Aldrich
Seroalbúmina bovina, lyophilized powder, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Lisozima from chicken egg white, powder or granules, ≥39,000 units/mg protein
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Sigma-Aldrich
Borohidruro de sodio, ReagentPlus®, 99%
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Sigma-Aldrich
Ammonium iron(II) sulfate hexahydrate, ACS reagent, 99%
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Sigma-Aldrich
Guanidina hydrochloride, organic base and chaeotropic agent, ≥99% (titration)
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Pepsina from porcine gastric mucosa, lyophilized powder, ≥3,200 units/mg protein
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Sigma-Aldrich
Ácido desoxirribonucleico sodium salt from salmon testes
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Sigma-Aldrich
Citocromo c from equine heart, ≥95% (SDS-PAGE)
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Sigma-Aldrich
Rhodamine B, ≥95% (HPLC)
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Butylated hydroxyanisole, ≥98.5%
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Millipore
Ácido etilenodiaminotetraacético disodium salt dihydrate
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Sigma-Aldrich
2,4-Dinitrophenol, moistened with water, ≥98.0%
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Sigma-Aldrich
Sodium deoxycholate, ≥97% (titration)
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Sigma-Aldrich
Hydrazine hydrate, reagent grade, N2H4 50-60 %
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Sigma-Aldrich
Ácido cítrico monohydrate, ACS reagent, ≥99.0%
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Sigma-Aldrich
21-Hydroxyprogesterone, ≥97% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Urea, ReagentPlus®, ≥99.5%, pellets
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Sigma-Aldrich
Hemoglobin equine, lyophilized powder
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