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Phosphorylation of filamin A by Cdk1 regulates filamin A localization and daughter cell separation.

Experimental cell research (2014-12-03)
Sandy G Y Szeto, Elizabeth C Williams, Adam D Rudner, Jonathan M Lee
RESUMEN

In cell culture, many adherent mammalian cells undergo substantial actin cytoskeleton rearrangement prior to mitosis as they detach from the extracellular matrix and become spherical. At the end of mitosis, the actin cytoskeleton is required for cytokinesis and the reassembly of interphase structures as cells spread and reattach to substrate. To understand the processes regulating mitotic cytoskeletal remodeling, we studied how mitotic phosphorylation regulates filamin A (FLNa). FLNa is an actin-crosslinking protein that was previously identified as a cyclin-dependent kinase 1 (Cdk1) binding partner and substrate in vitro. Using quantitative label-based mass spectrometry, we find that FLNa serines 1084, 1459 and 1533 are phosphorylated in mitotic HeLa cells and all three sites match the phosphorylation consensus sequence of Cdk1. To investigate the functional role of mitotic FLNa phosphorylation, we mutated serines 1084, 1459 and 1533 to nonphosphorylatable alanine residues and expressed GFP-tagged FLNa(S1084A,S1459A,S1533A) (FLNa-AAA GFP) in a FLNa-deficient human melanoma cell line called M2. M2 cells expressing FLNa-AAA GFP have enhanced FLNa-AAA GFP and actin localization at sites of contact between daughter cells, impaired post-mitotic daughter cell separation and defects in cell migration. Therefore, mitotic phosphorylation of FLNa is important for successful cell division and interphase cell behavior.

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Sigma-Aldrich
Acetonitrilo, suitable for HPLC, gradient grade, ≥99.9%
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Ácido fórmico, reagent grade, ≥95%
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Bicarbonato de sodio, ACS reagent, ≥99.7%
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Ácido fórmico, ACS reagent, ≥96%
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Bicarbonato de sodio, powder, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture
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Ácido fórmico, puriss. p.a., ACS reagent, reag. Ph. Eur., ≥98%
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Acetonitrilo, ACS reagent, ≥99.5%
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Bicarbonato de sodio, ReagentPlus®, ≥99.5%, powder
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MOPS, ≥99.5% (titration)
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Acetonitrilo, suitable for HPLC, gradient grade, ≥99.9%
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Fluoruro de fenilmetansulfonilo, ≥98.5% (GC)
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BIS-TRIS, ≥98.0% (titration)
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Ácido fórmico, puriss., meets analytical specifications of DAC, FCC, 98.0-100%
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Piruvato sódico, powder, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, ≥99%
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Bicarbonato de sodio, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ACS reagent, ≥99.7%
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Ácido fórmico, ACS reagent, ≥88%
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MOPS, BioPerformance Certified, suitable for cell culture, ≥99.5% (titration)
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Sodium phosphate, 96%
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Ethylenediaminetetraacetic acid solution, 0.02% in DPBS (0.5 mM), sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture
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Acetonitrilo, suitable for HPLC-GC, ≥99.8% (GC)
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Ethylenediaminetetraacetic acid, anhydrous, crystalline, BioReagent, suitable for cell culture
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Ethylenediaminetetraacetic acid, 99.995% trace metals basis
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Bicarbonato de sodio, puriss., meets analytical specification of Ph. Eur., BP, USP, FCC, E500, 99.0-100.5%, powder
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Fluoruro de fenilmetansulfonilo, ≥99.0% (T)
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MOPS, BioXtra, ≥99.5% (titration)
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Piruvato sódico, Hybri-Max, powder, suitable for hybridoma
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Acetonitrilo, biotech. grade, ≥99.93%
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Piruvato sódico, powder, BioXtra, suitable for mouse embryo cell culture
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BIS-TRIS, BioUltra, ≥99.0% (NT)
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