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MilliporeSigma

Two-stage chromatographic separation of aggregates for monoclonal antibody therapeutics.

Journal of chromatography. A (2014-12-03)
Vijesh Kumar, Anurag S Rathore
RESUMEN

Aggregates of monoclonal antibody (mAb) therapeutics, due to their perceived impact on immunogenicity, are recognized as a critical quality attribute by the regulatory authorities as well as the industry. Hence, removal of aggregates is a key objective of bioprocessing. At present, this is achieved by a combination of two or more orthogonal chromatographic steps with possible modalities of ion exchange, hydrophobic interaction and mixed mode. A two-stage chromatographic purification process consisting of ion-exchange and hydrophobic interaction modes is proposed in this paper for effective and efficient control of aggregates for a mAb therapeutic. The proposed scheme does not require any intermediate processing of the process stream. Further, baseline separation is achieved for monomer and aggregates resulting in robust performance. This was possible because the proposed operational scheme allowed for an addition of selectivities of the two chromatography modes vs. the traditional two column scheme where part of the separation of aggregates achieved by the first column is lost upon pooling. The proposed process scheme yielded improved separation of aggregates (0% vs. 1-2%) at >95% recovery and reduced overall process time (6h vs. 14 h) for a typical application. Further, clearance of host cell proteins was also shown to have improved with the suggested process scheme. Successful implementation of the proposed scheme has been demonstrated for two different monoclonal antibody therapeutic products.

MATERIALES
Referencia del producto
Marca
Descripción del producto

Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, ACS reagent, ≥99.0%
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio dibasic, ACS reagent, ≥98%
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
HEPES, ≥99.5% (titration)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
HEPES, BioPerformance Certified, ≥99.5% (titration), suitable for cell culture
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Precio
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Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, powder, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99.0%
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Ácido cítrico, meets analytical specification of Ph. Eur., BP, USP, E330, anhydrous, 99.5-100.5% (based on anhydrous substance)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio dibasic, puriss. p.a., ACS reagent, anhydrous, ≥99.0% (T)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, buffer substance, anhydrous, puriss. p.a., ACS reagent, reag. ISO, reag. Ph. Eur., 99.5-100.5%
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
HEPES, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (T)
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
HEPES buffer solution, 1 M in H2O
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, meets analytical specification of Ph. Eur., NF, E340, anhydrous, 98-100.5% (calc. to the dried substance)
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, for molecular biology, ≥98.0%
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
Cantidad
SAFC
HEPES
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Precio
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Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio dibasic, anhydrous, for luminescence, for molecular biology, BioUltra, ≥99.0% (T)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ácido cítrico, ≥99.5%, FCC, FG
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ácido cítrico, anhydrous, suitable for cell culture, suitable for plant cell culture
Número de referencia del producto (SKU)
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Cantidad
USP
Ácido cítrico, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
HEPES, BioXtra, suitable for mouse embryo cell culture, ≥99.5% (titration)
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Potassium phosphate dibasic solution, 1.0 M
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ácido cítrico, BioUltra, anhydrous, ≥99.5% (T)
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ácido cítrico, ACS reagent, ≥99.5%
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
SAFC
HEPES
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, BioUltra, for molecular biology, anhydrous, ≥99.5% (T)
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ácido cítrico, 99%
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Sigma-Aldrich
HEPES, BioXtra, pH 5.0-6.5 (1 M in H2O), ≥99.5% (titration)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, 99.99% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
2-Hydroxybutyric acid sodium salt, 97%
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio monobasic, ReagentPlus®
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Disponibilidad
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Fosfato de potasio dibasic, 99.95% trace metals basis
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
Cantidad
USP
Fosfato de potasio monobasic, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
Número de referencia del producto (SKU)
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