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Uracilo-ADN-glucosilasa

recombinant from E. coli K 12

• Sinónimos: PCR, UDG
• UNSPSC Code: 41106300

Propiedades

• recombinant: expressed in E. coli
• Quality Level: 100
• form: solution
• packaging: pkg of 100 U
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: 1000 U/mL
• technique(s): PCR: suitable; mutagenesis: suitable
• color: colorless
• pH: 7.9-8.1 (68 °F)
• solubility: water: miscible
• suitability: suitable for molecular biology
• application(s): life science and biopharma
• foreign activity: RNases 10 units, none detected; endonuclease 20 units, none detected
• storage temp.: −20°C

Descripción

General description

La uracil-ADN glucosilasa (UNG) contiene la forma recombinante de gran actividad de la enzima con el mismo nombre que se encuentra en procariotas y eucariotas. Hidroliza los enlaces uracil-glucosídicos en el ADN monocatenario o bicatenario, cortando el uracilo y creando sitios abásicos sensibles a los álcalis en el ADN. Esos sitios abásicos pueden ser hidrolizados mediante tratamiento con endonucleasas, calor o álcali. Dependiendo de cómo se prepare el ADN, la uracil-ADN glucosilasa puede utilizarse para conseguir una rotura U-ADN general, específica de sitio o específica de cadena.

Specificity

• La uracil-ADN glucosilasa hidroliza los enlaces uracil-glucosídicos en los sitios U-ADN del ADN monocatenario o bicatenario, cortando el uracilo y creando sitios abásicos sensibles a los álcalis en el ADN.
• La enzima es más activa en el ADN monocatenario que en ADN bicatenario.
• También se observó actividad en los oligonucleótidos de U-ADN pequeños y en el dUMP (Duncan, observaciones no publicadas).
• La uracil-ADN glucosilasa es inactiva en el ARN y el ADN nativo, carente de uracilo.

Inactivación por calor: 95 °C durante 10 min
La uracil-ADN glucosilasa permanece parcialmente activa (<10 %) después de un período de incubación de 30 minutos a 95 °C.

Application

La uracil-ADN glucosilasa puede utilizarse para romper el ADN en cualquier sitio en el que se haya incorporado un residuo de desoxiuridilato. El U-ADN puede prepararse mediante métodos in vitro como la PCR. Puede conseguirse rotura general, específica de sitio o específica de cadena con la uracil-ADN glucosilasa, dependiendo de cómo se prepare el U-ADN. Por consiguiente, la uracil-ADN glucosilasa puede ayudarle a:

• Evitar la contaminación por arrastre en la PCR
• Aumentar la eficacia de los procedimientos de mutagénesis específica de sitio
• Marcar las sondas de oligonucleótidos

Quality

La actividad de prevención del arrastre se valora añadiendo aproximadamente 10⁵dU que contenga las plantillas antes de la reacción de amplificación. Después del tratamiento con UNG, no pudieron detectarse productos de amplificación. La enzima no contiene exonucleasas ni endonucleasas contaminantes y se analiza para detectar la ausencia de ARNasas.

Unit Definition

Una unidad se define como la cantidad de uracil-ADN glucosilasa requerida para degradar por completo 1 μg de ADN monocatenario purificado que contenga uracilo (bacteriófago M13, crecimiento en E. coli CJ236 dut-ung-) a +37 °C en 60 minutos.
Una unidad Lindahl se define como la cantidad de enzima necesaria para liberar 1 μmol de uracilo a +37 °C en 1 minuto. Según nuestra definición de unidad, una unidad Lindahl es comparable a 520 000 unidades.

Volumen de actividad: 1 U/μl

Physical form

La enzima se suministra como una disolución 1 U/μl en tampón de conservación.

Storage and Stability

Se puede congelar (después de la síntesis de ADN)

Other Notes

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos de diagnóstico.

Información de seguridad

• Storage Class: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk_germany: WGK 1
• flash_point_f: No data available
• flash_point_c: No data available