細胞培養的膠原蛋白
膠原蛋白是哺乳類動物最豐富的蛋白質,也是結締組織和細胞外基質 (ECM) 的主要成分。在二維和三維細胞培養中,研究人員通常使用膠原蛋白來包覆培養皿。
通常,膠原蛋白首先從粗面內質網 (RER) 中的核糖體合成為富含獨立甘氨酸的前膠原蛋白單體鏈。運送到 RER 的管腔後,信號肽會被裂解以產生原膠原。賴氨酸和脯氨酸在管腔中羥基化和糖基化,形成由三個肽組成的螺旋。然後,它會被輸送到高爾基體,並透過外泌作用排出細胞。Procollagen 的 propetides 然後被移除,產生可接合形成纖維的 tropocollagen。Bornstein和Traub的"膠原蛋白類型"稱謂是由三重螺旋的縮氨酸組成決定的。
膠原蛋白有多種蛋白類型,其中最常見的是I型。III型膠原蛋白是第二種最豐富的膠原蛋白類型,通常與I型膠原蛋白共同存在於皮膚和血管中。IV 型Type V 則與膠原纖維組織和上皮細胞週期抑制有關。
開始前的注意事項
- 確保細胞健康且數量充足。
- 膠原蛋白溶液可在 0.25% 醋酸和 0.5% 氯仿溶液中透析消毒。
- 我們不建議使用膜過濾來消毒膠原蛋白溶液。
- 我們不建議使用膜過濾法消毒膠原溶液,因為我們發現這種方法會造成大量蛋白質流失。晾乾的塗層皿可以在無菌培養罩中用紫外光照射或用70%乙醇沖洗來消毒。
- 鍍膜後不要讓培養板/蓋片過度乾燥,因為這會影響細胞的附著。
- 方案中的所有步驟都需要在無菌條件下進行。
用于培养器皿的I型胶原蛋白包衣方案
- 将胶原蛋白加入醋酸中,得到0.1%(w/v)的胶原蛋白溶液。在室溫下攪拌 1-3 小時直到溶解。膠原蛋白溶液應稀釋 10 倍,以獲得 0.01% 的工作濃度。
- 我們建議將膠原蛋白溶液轉移到有螺旋蓋的玻璃瓶中,並小心地在底部鋪上氯仿。氯仿的用量應約為膠原蛋白溶液體積的 10%。請勿搖晃或攪拌。在冷處放置過夜。無菌移除含有膠原溶液的頂層。
- 塗覆平皿,讓蛋白質在室溫、37 °C下結合數小時,或在2-8 °C下過夜。
- 移除塗覆表面多餘的液體,讓其乾燥過夜。
- 如果膠原溶液不是無菌的,可以在無菌組織培養罩中用紫外光照射過夜的方法來消毒乾燥的塗層表面。
- 在引入細胞和培養基之前,用無菌組織培養級水或平衡鹽溶液沖洗。
圖 1. 膠原蛋白 I 型蛋白結構。
圖 2.A.膠原 II 型蛋白結構,主要為三股。B. 膠原 IV 型蛋白結構,主要為兩股。C. 膠原 IV 型蛋白結構,主要為單股。
膠原蛋白 IV 型
其他膠原蛋白:類型 II、類型 III、類型 I & III、類型 I & IV 和類型 V
為什麼我在膠原蛋白溶液中看到一些不溶解的微粒?
某些膠原蛋白產品的溶解度規格,如C7661,在1 mg/mL的水中,加入2 μL乙酸(或0.1 N乙酸)後,溶液呈透明至混濁的無色溶液,有少量不溶物。不溶物可藉由沉澱或離心除去。
產品在冷藏時已凝結。還可以使用嗎?
這種情況可能發生,但不會損害產品。當溫度升至室溫時,產品會液化。請確保在稀釋前已充分混合,以便塗佈於培養皿上。
所有的膠原蛋白產品都可以用來製作 3-D 膠原蛋白凝膠嗎?
不,並非所有膠原蛋白產品都能形成凝膠或用於 3D 應用。是否適用取決於膠原蛋白的類型、濃度和特定配方。請檢查上表中的產品規格,以確保它符合凝膠形成和 3D 應用的要求。
膠原蛋白塗層板可以儲存多久?
我們對鍍膜後印版的儲存不做任何建議。由於濕度等多種因素可能會影響塗層印版的壽命,因此客戶應自行確定印版是否可以儲存以及儲存條件。產品不應暴露在 50 °C 以上的溫度下。
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