用 Vitronectin 包覆組織培養板

Vitronectin (產品編號 SRP3186)用於包被培養容器，以便細胞附著。以下是 96 孔板的建議塗佈方案，塗佈濃度為 0.5 µg/cm²。請注意，最佳濃度因細胞品系而異。對於 96 孔板以外的培養容器，請相應調整此方案。若要計算玻璃纖維連接素的工作濃度，請使用表 1或以下公式：

工作濃度計算示例：

要在塗層濃度為 0.5 µg/cm²，請準備 9.6-10 mL 稀釋的 vitronectin 溶液 (0.1 mL/well × 96 孔，表 1)，濃度如下：

本範例中的 vitronectin 工作濃度為 1.5 µg/mL。每孔加入 0.1 mL 此工作溶液將產生 0.5 µg/cm² 的塗層濃度。

Bioassay
在使用 CHO 細胞進行的細胞附著試驗中，測量了在 HEK 293 細胞中表達的人類重組 Vitronectin (VTN) (SRP3186)的生物活性。EC₅₀ 定義為在以細胞為基礎的生物分析中，引起細胞附著增加 50%的有效濃度。

純度
在 HEK 293 細胞中表達的人體、重組維權素 (SRP3186) 的純度是在 SDS-PAGE (1.25 μg/lane.），然後用InstantBlue™染色（ISB1L）。(代表結果）

材料

• 1X PBS
• 純水（例如、產品型號 W3500）
• 無菌組織培養 96 孔板連蓋（產品型號. CLS3300)
• 重組人玻璃質連接素（產品編號. SRP3186）

程序

A.玻璃纖維連接素的製備

1. 將凍乾的玻璃纖維連接素與無菌水重組至 100-300 µg/mL 的最終濃度。此儲存液可在 2-8 ^oC下儲存一週。若要延長儲存時間，最好在含有載體蛋白（例如 0.1% BSA）的緩衝液中進一步稀釋，並以工作等分的方式儲存於 -20 to -80 ^oC.
2. 在 1X PBS 中進一步稀釋重組的 vitronectin 儲存溶液至 1.5 µg/mL 的最終濃度。例如，對於 10 mL 溶液（足夠塗佈一個 96 孔板），在 10 mL 1X PBS 中稀釋 75 µL 200 µg/mL 的儲備溶液。塗佈平板
   1. 向每個孔加入 100 µL 1.5 µg/mL vitronectin 溶液，最終塗佈濃度為 0.5 µg/cm².為了達到最佳效果，最好在 37 ^oC 下、5% CO₂ 和 95% 空氣中培養 2 小時，然後在 2-8 ^oC 下過夜。
   2. 噴霧玻璃鏈蛋白溶液，小心不要刮傷塗層的玻璃鏈蛋白。
   3. 用 1XPBS 洗每孔 3 次。
   4. 如需立即使用，吸出 1XPBS 。
   5. 若要立即使用，可吸出 1XPBS。或者，可將塗層板與 1XPBS一起在 2-8 ^oC、覆蓋並包裝在實驗室薄膜中儲存一週。

表一 用於各種組織培養容器的玻璃纖維蛋白的體積和工作濃度

Culture Dish	Approx.表面面積	稀釋後的葡萄鏈蛋白體積	葡萄鏈蛋白工作濃度
			對於 0.1 µg/cm2	對於 0.5 µg/cm2	對於 0.g/cm2
96 孔板	0.3 cm2	0.1 mL/孔	0.3 µg/mL	1.5 µg/mL	3 µg/mL
24 孔板	2 cm2	0.2 mL/孔	1 µg/mL	5 µg/mL	10 µg/mL<
12 孔板	4 cm2	0.4 mL/孔	1  µg/mL	5 µg/mL	10 µg/mL
6 孔板	9 cm2	1 mL/孔	0.9  µg/mL	4.5 µg/mL	9 µg/mL
35 mm 平板	9 cm2	1 mL	0.9  µg/mL	4.5 µg/mL	9 µg/mL
60 mm 平板	21 cm2	1 mL	2.1 µg/mL	10.5 µg/mL	21 µg/mL
100 mm 平板	55 cm2	2 mL	2.75  µg/mL	13.75 µg/mL	27.5 µg/mL
150 mm 平板	152 cm2	6 mL	2.53 µg/mL	12.67 µg/mL	25.33 µg/mL
T-25 燒瓶	25 cm2	2.5 mL	1 µg/mL	5 µg/mL	10 µg/mL
T-75 燒瓶	75 cm2	7.5 mL	1 µg/mL	5 µg/mL	10 µg/mL