COHISR-RO
Roche
Resina de purificación de etiquetas de His cOmplete™
suspension, suitable for protein purification, matrix Sepharose-CL 6B
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About This Item
UNSPSC Code:
41116133
NACRES:
NA.21
Productos recomendados
form
suspension
packaging
pkg of 200 mL (05893801001 [settled resin volume])
pkg of 25 mL (05893682001 [settled resin volume])
manufacturer/tradename
Roche
technique(s)
protein purification: suitable
matrix
Sepharose-CL 6B
storage temp.
2-8°C
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General description
Tamaño de la microesfera: entre 45 y 165μM.
Capacidad de adsorción: ≥ 40 mg de proteína por ml de volumen de lecho de la resina. La capacidad de adsorción de la resina a varios tipos de proteínas puede variar en función de las características de la proteína, como su tamaño. Las columnas de purificación cOmplete His-Tag se unen con una elevada especificidad a la proteína etiquetada con polihistidina. Como consecuencia, la cinética de adsorción puede parecer diferente cuando se compara con las matrices de quelatos metálicos convencionales. Puede alcanzarse la capacidad completa de las columnas de purificación cOmplete His-Tag dando más tiempo para que la proteína se una a la resina al reducir el caudal durante el procedimiento de purificación por cromatografía.
Caudal lineal máximo: 1,420 cm/hora
Caudal volumétrico recomendado: El caudal volumétrico es una función de la sección transversal de la columna. Utilizando la siguiente fórmula, el caudal lineal puede convertirse en flujo volumétrico (ml/minuto): Caudal lineal (cm/hora) × área de la sección transversal de la columna (cm2)/60. El área de la sección transversal de la columna se define como Π× r2, donde Π es la constante pi y r es el radio interno de la columna.
Concentración recomendada de imidazol para cargar o lavar: La adsorción inespecífica de las proteínas sin una cola de His es baja. Utilice imidazol hasta 5 mM en los tampones de carga o lavado. Si se establece un nuevo ensayo para la purificación de proteínas con cola de His con columnas de purificación cOmplete His-Tag, no debe utilizarse imidazol. Si, por ejemplo, debe mejorarse la pureza de la proteína etiquetada con His después de esta primera etapa, utilice imidazol a una concentración final de hasta 5 mM en una segunda etapa.
Concentración recomendada de imidazol para elución: Hasta 500 mM. Tenga en cuenta: Al contrario que otras resinas disponibles, la proteína etiquetada con His ligada a la resina eluye normalmente de las columnas de purificación cOmplete His-Tag con una menor concentración de imidazol, por ejemplo de 25 a 45 mM.
Compatibilidad para un almacenamiento prolongado: Etanol al 20 %, pH de 4,0 a 9,0
Compatibilidad durante la cromatografía: La resina es compatible con EDTA 10 mM, DTT 10 mM durante la purificación (1 hora de incubación), HCl de guanidinio 6 M, urea 8 M, pH de 2,0 a 14,0.
Compatibilidad durante la limpieza: SDS al 4 %
Capacidad de adsorción: ≥ 40 mg de proteína por ml de volumen de lecho de la resina. La capacidad de adsorción de la resina a varios tipos de proteínas puede variar en función de las características de la proteína, como su tamaño. Las columnas de purificación cOmplete His-Tag se unen con una elevada especificidad a la proteína etiquetada con polihistidina. Como consecuencia, la cinética de adsorción puede parecer diferente cuando se compara con las matrices de quelatos metálicos convencionales. Puede alcanzarse la capacidad completa de las columnas de purificación cOmplete His-Tag dando más tiempo para que la proteína se una a la resina al reducir el caudal durante el procedimiento de purificación por cromatografía.
Caudal lineal máximo: 1,420 cm/hora
Caudal volumétrico recomendado: El caudal volumétrico es una función de la sección transversal de la columna. Utilizando la siguiente fórmula, el caudal lineal puede convertirse en flujo volumétrico (ml/minuto): Caudal lineal (cm/hora) × área de la sección transversal de la columna (cm2)/60. El área de la sección transversal de la columna se define como Π× r2, donde Π es la constante pi y r es el radio interno de la columna.
Concentración recomendada de imidazol para cargar o lavar: La adsorción inespecífica de las proteínas sin una cola de His es baja. Utilice imidazol hasta 5 mM en los tampones de carga o lavado. Si se establece un nuevo ensayo para la purificación de proteínas con cola de His con columnas de purificación cOmplete His-Tag, no debe utilizarse imidazol. Si, por ejemplo, debe mejorarse la pureza de la proteína etiquetada con His después de esta primera etapa, utilice imidazol a una concentración final de hasta 5 mM en una segunda etapa.
Concentración recomendada de imidazol para elución: Hasta 500 mM. Tenga en cuenta: Al contrario que otras resinas disponibles, la proteína etiquetada con His ligada a la resina eluye normalmente de las columnas de purificación cOmplete His-Tag con una menor concentración de imidazol, por ejemplo de 25 a 45 mM.
Compatibilidad para un almacenamiento prolongado: Etanol al 20 %, pH de 4,0 a 9,0
Compatibilidad durante la cromatografía: La resina es compatible con EDTA 10 mM, DTT 10 mM durante la purificación (1 hora de incubación), HCl de guanidinio 6 M, urea 8 M, pH de 2,0 a 14,0.
Compatibilidad durante la limpieza: SDS al 4 %
La resina de purificación cOmplete His-Tag es una innovadora matriz IMAC (cromatografía de afinidad con metales inmovilizados) de gran capacidad para la purificación de proteínas etiquetadas con histidina a través de procedimientos de cromatografía de líquidos o por lotes de lisados totales. Al contrario que todas las resinas actualmente disponibles, que están basadas principalmente en la química del quelante NTA o del tipo IDA, esta resina es la única resina del mercado que tolera tampones que contienen EDTA. Dado que el EDTA es un inhibidor conocido de las metaloproteasas, que suelen estar presentes en cualquier tipo de célula, este material de cromatografía proporciona la opción de aumentar la protección de su proteína diana al complementar las disoluciones tampón con EDTA. Esta resina, por consiguiente, permite una mayor protección de sus proteínas frente a la degradación y, al mismo tiempo, enriquece la proteína utilizando el método de purificación por afinidad bien establecido.
Además, la resina mantiene su capacidad de unión al margen de si se están utilizando proteínas de bajo o de alto peso molecular, y su especificidad permite una purificación en una etapa. Al utilizar uno de los quelantes más fuertes disponible, se asegura la mínima contaminación de sus fracciones de flujo continuo con iones metálicos, lo que salvaguarda las aplicaciones consecutivas.
La resina de purificación cOmplete His-Tag también está disponible en formato preenvasado: con 1 ml o 5 ml de resina.
Además, la resina mantiene su capacidad de unión al margen de si se están utilizando proteínas de bajo o de alto peso molecular, y su especificidad permite una purificación en una etapa. Al utilizar uno de los quelantes más fuertes disponible, se asegura la mínima contaminación de sus fracciones de flujo continuo con iones metálicos, lo que salvaguarda las aplicaciones consecutivas.
La resina de purificación cOmplete His-Tag también está disponible en formato preenvasado: con 1 ml o 5 ml de resina.
Application
Expresión de proteína recombinante
La purificación de una proteína de interés es a menudo esencial para determinar su función, estructura o interacciones, para generar anticuerpos específicos o para preparar enzimas destinadas a aplicaciones prácticas. El aislamiento de las proteínas expresadas naturalmente de su fuente original puede ser un proceso complejo que requiere numerosas etapas cromatográficas. La expresión de proteínas recombinantes en organismos huéspedes especializados puede simplificar enormemente esta tarea. Dichos sistemas de expresión generalmente garantizan mayores niveles de expresión. La fusión de la proteína específica a una etiqueta confiere también una capacidad de unión ventajosa a una matriz de afinidad.
Purificación de proteínas utilizando Ni2+ inmovilizado
La técnica más común en la purificación de las proteínas por afinidad implica la preparación mediante ingeniería genética de una secuencia de seis a 14 histidinas en el extremo N-terminal o C-terminal (o incluso en un bucle expuesto) de la proteína. Estas prolongaciones de polihistidina se unen con fuerza a iones metálicos divalentes como el níquel y el cobalto. Este efecto puede utilizarse para separar proteínas. Los iones metálicos pueden inmovilizarse en una matriz utilizando un quelante, que sigue permitiendo la interferencia del ion con la etiqueta de polihistidina de la proteína. Cuando se hacen pasar estas proteínas etiquetadas con histidina por una columna que contiene iones metálicos inmovilizados, las proteínas se unen a la columna a través de la etiqueta. Prácticamente todas las proteínas no etiquetadas atraviesan la columna. La proteína es liberada de la columna por elución con imidazol, que compite con la etiqueta de polihistidina para unirse a la columna, o mediante la disminución del pH, que reduce la afinidad de la etiqueta por la resina. Si bien este procedimiento se utiliza generalmente para la purificación de proteínas recombinantes con una etiqueta de afinidad genotecnológica, también puede utilizarse para proteínas naturales con una afinidad inherente por los cationes divalentes.
Colas de His
Idealmente la proteína diana con una cola de histidina se une con mucha más fuerza a la matriz de quelato Ni2+ que la proteína endógena que contiene histidina del huésped de expresión. La fuerza de unión relativa depende de cuántas histidinas puedan unirse simultáneamente a la matriz (efecto de avidez). Las etiquetas de histidina más largas confieren una unión más fuerte y mejor separación entre la proteína diana y las proteínas del huésped potencialmente contaminantes. La cola clásica de histidina tiene seis histidina consecutivas. Colas con 10 a 14 histidinas pueden producir una mejor purificación. Más importante, las proteínas etiquetadas con histidina pueden purificarse utilizando matrices de quelato Ni2+ en condiciones nativas y desnaturalizantes. Debido a su naturaleza hidrófila y flexible, esas matrices aumentan la solubilidad de las proteínas diana y sólo rara vez interfieren en la función de la proteína. Esta exclusiva combinación de características hace que la cola de His se convierta en una herramienta versátil en una amplia gama de aplicaciones de purificación de proteínas.
La purificación de una proteína de interés es a menudo esencial para determinar su función, estructura o interacciones, para generar anticuerpos específicos o para preparar enzimas destinadas a aplicaciones prácticas. El aislamiento de las proteínas expresadas naturalmente de su fuente original puede ser un proceso complejo que requiere numerosas etapas cromatográficas. La expresión de proteínas recombinantes en organismos huéspedes especializados puede simplificar enormemente esta tarea. Dichos sistemas de expresión generalmente garantizan mayores niveles de expresión. La fusión de la proteína específica a una etiqueta confiere también una capacidad de unión ventajosa a una matriz de afinidad.
Purificación de proteínas utilizando Ni2+ inmovilizado
La técnica más común en la purificación de las proteínas por afinidad implica la preparación mediante ingeniería genética de una secuencia de seis a 14 histidinas en el extremo N-terminal o C-terminal (o incluso en un bucle expuesto) de la proteína. Estas prolongaciones de polihistidina se unen con fuerza a iones metálicos divalentes como el níquel y el cobalto. Este efecto puede utilizarse para separar proteínas. Los iones metálicos pueden inmovilizarse en una matriz utilizando un quelante, que sigue permitiendo la interferencia del ion con la etiqueta de polihistidina de la proteína. Cuando se hacen pasar estas proteínas etiquetadas con histidina por una columna que contiene iones metálicos inmovilizados, las proteínas se unen a la columna a través de la etiqueta. Prácticamente todas las proteínas no etiquetadas atraviesan la columna. La proteína es liberada de la columna por elución con imidazol, que compite con la etiqueta de polihistidina para unirse a la columna, o mediante la disminución del pH, que reduce la afinidad de la etiqueta por la resina. Si bien este procedimiento se utiliza generalmente para la purificación de proteínas recombinantes con una etiqueta de afinidad genotecnológica, también puede utilizarse para proteínas naturales con una afinidad inherente por los cationes divalentes.
Colas de His
Idealmente la proteína diana con una cola de histidina se une con mucha más fuerza a la matriz de quelato Ni2+ que la proteína endógena que contiene histidina del huésped de expresión. La fuerza de unión relativa depende de cuántas histidinas puedan unirse simultáneamente a la matriz (efecto de avidez). Las etiquetas de histidina más largas confieren una unión más fuerte y mejor separación entre la proteína diana y las proteínas del huésped potencialmente contaminantes. La cola clásica de histidina tiene seis histidina consecutivas. Colas con 10 a 14 histidinas pueden producir una mejor purificación. Más importante, las proteínas etiquetadas con histidina pueden purificarse utilizando matrices de quelato Ni2+ en condiciones nativas y desnaturalizantes. Debido a su naturaleza hidrófila y flexible, esas matrices aumentan la solubilidad de las proteínas diana y sólo rara vez interfieren en la función de la proteína. Esta exclusiva combinación de características hace que la cola de His se convierta en una herramienta versátil en una amplia gama de aplicaciones de purificación de proteínas.
Features and Benefits
La resina de purificación cOmplete His-Tag es la única resina para purificar grandes cantidades de proteína sin compromisos.
- Utilice las condiciones amortiguadores más adecuadas para su proteína: Mantenga su proteína cómoda y deje que sea ella, no su resina de purificación, quien determine si usa DTT, EDTA u otras sustancias amortiguadoras.
- Obtenga repetidamente proteína de gran pureza: Purificación de un solo paso sin recarga de resina.
- Proteja a su proteína del tóxico níquel: Reduzca la oxidación y la agregación de proteínas causadas por resinas que sueltan níquel.
- Trabaje en un entorno inocuo y ecológico: Evite manipular el níquel tóxico y elimine por completo los costes de su eliminación.
Physical form
resina al 5% en suspensión, precargada con Ni2+
Other Notes
Resina compatible con EDTA para la purificación de las proteínas etiquetadas con poli-histidina.
Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos de diagnóstico.
Legal Information
cOmplete is a trademark of Roche
signalword
Warning-Warning
hcodes
Hazard Classifications
Flam. Liq. 3
Storage Class
3 - Flammable liquids
wgk_germany
WGK 1
flash_point_f
93.2 °F
flash_point_c
34 °C
Certificados de análisis (COA)
Busque Certificados de análisis (COA) introduciendo el número de lote del producto. Los números de lote se encuentran en la etiqueta del producto después de las palabras «Lot» o «Batch»
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