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选择合适的定制qPCR探针

qPCR中可能使用的定制探针有很多选择，而且每种探针在不同的应用中都有各自的优点。下面的摘要重点介绍了常用定制qPCR探针的应用。

应用参考指南

报告基团、淬灭基团和仪器兼容性

现代qPCR平台通常具有多个检测通道，因而可灵活的选择探针标记。选择与qPCR仪器的检测通道兼容的荧光标记，并确保正确的仪器滤光片设置或校准检测非常重要。报告基团和仪器兼容性列表列出了一些最广泛使用的qPCR平台，同时指出了哪些荧光标记适合使用。请注意，所列出的并非所有标签，仍有许多可替代报告基团。若需在这些平台上使用非标准标记，请与当地的技术服务专业人员联系以获取相关信息。

染料替代品

一些qPCR仪器通常需要使用市场上不可获取的专有染料，例如VIC^®和NED™。在寻找染料替代品时，以下标准非常重要：

激发和检测波长应与仪器光源和检测系统兼容
对于探针来说，淬灭基团能有效地吸收报告基团的发射波长的光
消光系数越高，染料越亮，这有助于实现更灵敏的检测
当使用多种染料（多重）时，每种染料的激发和发射波长必须是独立的，以避免相互干扰

淬灭基团

淬灭分子通常位于单分子探针的3'末端，例如双标记探针、分子信标和Scorpions探针。淬灭基团可能是荧光(TAMRA™)或非荧光分子(DABCYL, Black Hole Quencher™ (BHQ™)。为获得最佳性能，淬灭基团的吸收光谱应尽可能与报告基团的发射光谱相匹配。我们推荐的报告基团/淬灭基团组合可以在光谱性质表中找到。