鱼油胶囊和养殖鲑鱼中ω-3脂肪酸的气相色谱分析

Katherine K. Stenerson, Principal Scientist; Michael R. Halpenny, R&D Technician; Leonard M. Sidisky, R&D Manager; and Michael D. Buchanan, Product Manager,

Reporter US Volume 31.2

ω-3脂肪酸的摄取对健康的益处是多方面的¹。在人体生理学中最重要的变异体似乎是：

• C18:3n3,α-亚麻酸 (ALA)
• C20:5n3, 二十碳五烯酸 (EPA)
• C22:6n3, 二十二碳六烯酸 (DHA)

本文旨在鉴定两种不同来源鱼油中的ω-3脂肪酸。每种来源都只处理了单个样本，因此本文中这些不同来源之间的谱图比较不可视为定论。

实验

本文分析的样品如下：

• 当地购买的鱼油胶囊，标明含有 EPA、DHA 和“其他”ω-3。
• 大西洋鲑鱼片（农场养殖），冷冻和真空包装。

如 AOAC 方法 991.39²中所述，制备鱼油胶囊以依次进行碱水解和甲基化的分析。在整个提取过程中用氮气覆盖混合物以防止多不饱和脂肪酸的氧化。鲑鱼样品依照AOCS官方方法 Ce 1k-09³进行酸消化、碱水解和甲基化。在提取之前，将二丁基羟基甲苯(BHT)作为抗氧化剂添加到鲑鱼样品中。分析前，两种方法都使用甲基化操作程序将脂肪酸转化为脂肪酸甲酯 (FAME)。在进行气相色谱(GC)分析之前，将所有提取物浓缩至1 mL。

使用两种选择性略有不同的毛细管气相色谱柱进行分析，条件依照 AOAC 991.39 和 AOCS Ce 1i-07 方法^2,4。这是可行的，因为两种方法共享相同的一组运行条件。将保留时间与标准进行比对以鉴定谱峰，数据已在之前发布⁵。

结果和讨论

鱼油胶囊包装上标明的鱼源有沙丁鱼和凤尾鱼。根据这些鱼油公开的脂肪酸组成数据，预计FAME中含量最丰富的是C16:0和C20:5n3 (EPA)，其次是C16:1、C18:1和C22:6n3(DHA)⁶。鱼油胶囊提取物的色谱图见 图1，符合预期模式。检测到的C14：0谱峰来自鱼油的沙丁鱼部分，这种脂肪酸在凤尾鱼油中的含量要低得多。

图 1. 鱼油胶囊

GC条件

• 色谱柱：Omegawax^®，30 m x 0.25 mm 内径，0.25 µm（产品编号24136） SLB^®- IL60，30 m x 0.25 mm 内径，0.20 µm（产品编号29505-U）；
• 温箱：170 °C, 1 °C/min to 225 °C；
• 进样温度：250 °C；
• 检测器：FID，260 °C；载气：氦气，1.2 mL/min；
• 进样体积：1 µL，100:1 分流；
• 衬管：4 mm 内径，分流/不分流型，羊毛填充单锥形FocusLiner™设计

图2显示了农场养殖大西洋鲑的色谱图。公开的鲑鱼油脂肪酸组成表明C22:6n3(DHA)、C18:1和C20:5n3 (EPA)是最丰富的，其次是 C16:0、C16:1、C18:0、C20:1和 C22:1[6]。虽然检测到了所有列出的脂肪酸，但样品获得的谱图与此模式不符。具体来说，相对于C22：6n3(DHA)和C20：5n3(EPA)，C22:6n3(DHA)和C20:5n3(EPA)的水平更高 ，这可能是鱼被投喂特定食物的结果。

这些分析物用两种色谱柱均观察到良好的峰形。由于两种色谱柱具有相似的选择性，洗脱顺序相当，但并不完全相同。使用 SLB-IL60：

• 观察到C22：6n3 (DHA)在C22：5n3 之前洗脱
• C20：4n3和C20：5n3 (EPA)发生部分共洗脱

这些突出体现了不同色谱柱之间的分析物-固定相机理的差异。最后，用SLB-IL60获得整体更快的洗脱（31 min对比52 min）。

图 2. 农场养殖大西洋鲑

GC条件

谱峰ID和条件与 图1相同

结论

本文提供的数据表明两种不同来源的鱼油中可能存在不同的ω-3脂肪酸。每种来源都只处理了单个样本，因此本文中这些不同来源之间的谱图比较不可视为定论。两个选择性略有不同的GC色谱柱用于生成具有细微洗脱顺序变化的色谱图，为希望进行验证性分析的分析人员指明了这些阶段。

参考文献

1. Kris-Etherton PM, Harris WS, Appel LJ. 2002. Fish Consumption, Fish Oil, Omega-3 Fatty Acids, and Cardiovascular Disease. Circulation. 106(21):2747-2757. https://doi.org/10.1161/01.cir.0000038493.65177.94

2. 1995. AOAC Official Method 991.39. [Internet]. Fatty Acids in Encapsulated Fish Oils and Fish Oil Methyl and Ethyl Esters: AOAC International. Available from: https://wenku.baidu.com/view/eec98d47915f804d2b16c17e?from=search

3. Clapper GM. 2009. AOCS Official Method Ce 1k-09 Direct Methylation of Lipids in Foods for the Determination of Total Fat, Saturated, cis-Monounsaturated, cis-Polyunsaturated and trans Fatty Acids by Gas Chromatography” . [Internet]. Available from: https://www.aafco.org/Portals/0/SiteContent/Regulatory/Committees/Lab-Methods-and-Services/Methods/fat_analysis_aocs.pdf

4. AOCS Official Method Ce 1i-07. [Internet]. Determination of Saturated, cis-Monounsaturated, and cis-Polyunsaturated Fatty Acids in Marine and Other Oils Containing Long Chain Polyunsaturated Fatty Acids (PUFAs) by Capillary GLC: AOCS Official Methods and Recommended Practices..

5. Stenerson K, Halpenny M, Sidisky L, Buchanan M. 2013. Ionic Liquid GC Column Option for the Analysis of Omega 3 and Omega 6 Fatty Acids. [Internet]. Supelco Reporter 31.1 (February 2013), p. 10..

6. Firestone (ed.), D. 2006. Physical and Chemical Characteristics of Oils, Fats, and Waxes AOCS Press,. Washington, D.C.: US FDA.