微生物生长实验方案

大肠杆菌的培养

LB肉汤（Miller）是一种用于在从小型培养到发酵级的不同规模下培养大肠杆菌的颗粒状培养基。这些颗粒可确保能在水中快速、均匀地溶解，并防止培养基结块和空气中粉末的吸入。 

所需材料：

试剂	设备
纯大肠杆菌培养物	柜式培养箱（37 °C）
LB – Miller	摇床培养箱（37 °C）
LB – Miller板	培养皿，无菌
	培养瓶，无菌

准备起始培养物

1. 从新划线的平板上挑取单个菌落，并接种至3到5mL培养基中以获得起始培养物。
   
2. 使用适当的抗生素，在37°C*下以250-300rpm摇瓶培养约8小时。
   
3. 将起始培养物接种于过夜培养物中。用适当体积的培养基在大的培养瓶中以1：500至1：1000的比例稀释起始培养物，并在37℃*下以250-300rpm摇瓶孵育12至16小时。

*该温度适用于标准的大肠杆菌。一些细菌需要不同的培养温度。

大肠杆菌的悬浮培养

1. 制备LB培养基：称重适量粉末培养基，将其加入到无菌瓶的水中
2. 将肉汤高温高压灭菌，并冷却至室温
   （或者可以使用即用型LB培养基）
   
3. 在层流室中，将约1 mL的培养一夜的大肠杆菌培养物转移至瓶子中
4. 用无菌棉（非吸附型）塞密封瓶口，切勿塞紧
5. 在37 ℃连续摇动孵育过夜

接种大肠杆菌

1. 制备LB琼脂：称重适量粉末培养基、琼脂和水，将其加入到无菌瓶中
2. 将培养基高温高压灭菌，并冷却至瓶子刚好不烫手的温度
3. 在层流室中，将约25-30 mL的LB琼脂倒入无菌板中
4. 将板静置于层流室中凝固，盖子略微打开
   （这些板也可以在4°C下倒置存放以备将来使用）
   （或者可以使用即用型LB琼脂板）
   • 用无菌接种环轻轻刮擦冷冻大肠杆菌甘油原液的表面
   • 用无菌接种环从培养板中取出大肠杆菌菌落
   • 加入10-100 μL大肠杆菌悬浮培养物，并再加一个LB琼脂板
     • 在LB琼脂板上划擦接种环
     • 使用无菌玻璃涂布器将培养物铺在整个培养板上
5. 将培养板在37 ℃下倒置孵育一夜

高级实验方案

接种噬菌体M13

所需材料：

试剂	设备
纯大肠杆菌培养物	柜式培养箱（37 °C）
LB琼脂EZMix™ （产品编号：L7533）	水浴（47 °C）
适当的选择抗生素	培养皿
IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷） （产品编号：I6758）	15 mL聚丙烯培养管（无菌）
X-gal（产品编号：B9146）
氯化镁

1. 制备纯大肠杆菌培养物：将单个菌落接种到5mL LB或YT培养基中。
2. 在LB或YT培养基中制备10倍连续稀释的M13噬菌体原液。
3. 在无菌试管中，制备补充有5mM MgCl₂的LB琼脂或YT培养基；在47°C平衡；添加适量的X-gal和IPTG溶液。
4. 加入100 μL纯细菌培养物连续稀释的M13噬菌体原液，温和涡旋混合。
5. 将含有X-gal和IPTG的LB琼脂或YT培养基倒入含有感染细菌的试管中，温和涡旋混合。
6. 将内容物转移至培养板中，并旋转以均匀分布受感染的细菌。
7. 静置培养板使其凝固，然后在37℃下倒置孵育。
8. M13噬菌体的淡蓝色斑块出现在细菌生长的菌苔上。

以下是我们公司提供的细菌肉汤成分：

细菌肉汤成分	名称	形式
Y0875	选择酵母提取物	粉末
N4767	N-Z-Amine® EKC
Y1626	选择酵母提取物，EZMix™ 粉末	EZMix™
T2559	EZMix™ 胰蛋白胨

参考文献

1. Sambrook J, Fritsch E, Maniatis T. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.

2. Parija S. 2009. Textbook of Microbiology and Immunology. Elsevier India.

3. Types of Growth Media Used to Culture Bacteria. [Internet].[updated 01 Aug 2016; cited 04 Aug 2020]. Available from: http://www.scienceprofonline.org/microbiology/types-culture-media-for-growing-bacteria