Técnicas de análisis pull-down de proteínas

Aplicaciones de la precipitación por afinidad con GST

La glutatión S-transferasa (GST) es una proteína de 211 aminoácidos que se encuentra en la mayoría de los organismos. La GST se integra a menudo en vectores de expresión para producir la etiqueta de fusión dentro de los sistemas de expresión de proteínas de E. coli. La etiqueta GST es una etiqueta proteica grande, de aproximadamente 26 kDa, y puede expresarse en bacterias, levaduras, células de mamífero y de insecto. La etiqueta GST es conveniente cuando es necesario proteger la proteína recombinante de la escisión intracelular por proteasas y cuando debe mejorarse la solubilidad de la proteína etiquetada. Además, la proteína GST proporciona una etiqueta de alta afinidad para facilitar la purificación y para experimentos de precipitación utilizando resinas de afinidad económicas que se realizan en condiciones de elución suave.

Co-inmunoprecipitación

El análisis pull-down es ideal para la verificación de los resultados de la coinmunoprecipitación y un excelente método para identificar interacciones interproteicas desconocidas junto con el estado de activación de proteínas específicas. A diferencia de los métodos de precipitación por afinidad, en la IP se utilizan anticuerpos para unirse a, y asilar, los antígenos de muestras biológicas complejas. 

Por co-IP se entiende el uso de un anticuerpo para unirse a un antígeno en un complejo multiproteico. A continuación, el complejo es capturado con la adición de un medio de proteína A o proteína G. La elevada afinidad de la proteína A/G con la región Fc de los anticuerpos IgG policlonales y monoclonales los convierte en un componente fundamental en la purificación de la proteína o el complejo proteico de interés. Los métodos de precipitación de proteínas constituyen una herramienta esencial para investigar las redes de interacción proteína-proteína; sin embargo, la elección del método específico vendrá determinada por la aplicación específica que precise el investigador.