Rozwiązywanie problemów ze zlepianiem się komórek

Skupiska komórek: przegląd

Komórki w zawiesinie mogą łączyć się ze sobą i tworzyć skupiska z różnych powodów. Najczęstszą przyczyną zlepiania się komórek jest obecność wolnego DNA i szczątków komórkowych w pożywce hodowlanej, która występuje po lizie komórek. Lepka natura DNA powoduje, że komórki i inne szczątki łączą się w duże grudki. Poniżej przedstawiono niektóre przyczyny lizy komórek i uwalniania DNA do pożywki hodowlanej.

• Nadtrawianie: nadmierne traktowanie enzymami proteolitycznymi - takimi jak trypsyna powszechnie stosowana do odłączania komórek - może powodować zlepianie się komórek
• Stres środowiskowy: siła mechaniczna, powtarzające się cykle zamrażania/rozmrażania i inne stresy środowiskowe mogą przyspieszyć śmierć komórek, której wczesnym objawem może być adhezja komórka-komórka.
• Dezagregacja tkanki: przygotowanie zawiesiny pojedynczych komórek z pierwotnej tkanki za pomocą protokołów chemicznych, mechanicznych lub enzymatycznych może prowadzić do pęknięcia niektórych komórek.Kolagenaza jest zwykle potrzebna do trawienia macierzy zewnątrzkomórkowej podczas tworzenia zawiesiny jednokomórkowej z tkanki.Zobacz środki do dysocjacji tutaj.
• Przerost: Gdy komórki osiągną konfluencję, dochodzi do nadmiernego gromadzenia się resztek komórkowych i wolnego DNA z lizy komórek.

Rozwiązywanie problemów

Skupiska komórek ograniczają dostęp do krytycznych składników odżywczych i w rezultacie utrudniają ogólny wzrost komórek. Dodatkowo, zlepki komórek utrudniają dalsze testy, które wymagają czystego przygotowania pojedynczych komórek (np. cytometria przepływowa). W zależności od przyczyny zlepiania się komórek, w poniższej tabeli proponujemy rozwiązania zapobiegające temu zjawisku.

Przyczyna zbrylania	Rozwiązanie
Liza komórek i uwalnianie DNA	DNaza I może być stosowana podczas dezagregacji tkanek i regularnej hodowli komórek, aby zapobiec zlepianiu się różnych typów komórek. Uwaga: DNaza I jest maksymalnie aktywna w obecności jonów dwuwartościowych (Mg2+, Ca2+)
Kationy dwuwartościowe	Chelatory takie jak cytrynian i EDTA mogą być stosowane do usuwania wapnia z pożywek do hodowli komórkowych. Bezsiarczanowy, zbilansowany roztwór soli bez Ca2+/Mg2+ może być również użyty.
Gęstość komórek	Odnieś się do literatury dotyczącej linii komórkowych lub opublikowanych charakterystyk dla zalecanej gęstości komórek przed pasażowaniem.
Obsługa	Obsługuj komórki ostrożnie i używaj odpowiednich ustawień wirówki podczas granulowania. Niewielkie zbrylenia mogą być rozwiązane przez rozcieranie lub delikatne pipetowanie komórek w górę i w dół.
Zanieczyszczenie mikoplazmą	Odrzuć zanieczyszczone komórki i zdezynfekuj okap hodowlany i inkubator do hodowli komórkowych. Przestrzegaj dobrych praktyk laboratoryjnych, aby uniknąć zanieczyszczenia.

Powiązane produkty

Accutase	Trypsyna	DNAse I
Collagenase	Media dysocjacyjne	Ca2+, Mg2+-free Media
Roztwór trypsyny-EDTA.	Benzonase Nuclease	Look-out Mycoplasma Detection Kit