17-10237

ChIPAb+ HDAC2 - przeciwciało z walidacją ChIP i zestaw starterów

from mouse

• Synonim(y): Czynnik związany z YY1, deacetylaza histonowa 2, homolog regulatora transkrypcji RPD3
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.32
• eCl@ss: 32160702
• Clone: monoclonal
• Species reactivity: rat, bovine, mouse, hamster, human
• Application: ChIP, WB
• Citations: 5

Właściwości

• biological source: mouse
• Quality Level: 100
• clone: monoclonal
• species reactivity: rat, bovine, mouse, hamster, human
• manufacturer/tradename: ChIPAb+, Upstate^®
• technique(s): ChIP: suitable, western blot: suitable
• isotype: IgG1
• NCBI accession no.: NP_001518
• UniProt accession no.: Q92769
• shipped in: dry ice
• Gene Information: human ... HDAC2(3066)

Opis

General description

Deacetylaza histonowa 2 (HDAC2) lub homolog regulatora transkrypcji RPD3 L1 jest wysoce homologiczny do genu czynnika transkrypcyjnego drożdży RPD3 (zredukowana zależność od potasu 3). Podobnie jak w drożdżach, ludzki HDA2 prawdopodobnie bierze udział w regulacji struktury chromatyny podczas transkrypcji. Został on powiązany z YY1, czynnikiem transkrypcyjnym ssaków z palcem cynkowym, który negatywnie reguluje transkrypcję poprzez wiązanie RPD3 do DNA jako kofaktor. Proces ten jest wysoce konserwatywny od drożdży do człowieka.

Wszystkie przeciwciała ChIPAb+ są indywidualnie walidowane pod kątem wytrącania chromatyny, w każdej partii, za każdym razem. Każdy zestaw przeciwciał ChIPAb+ zawiera startery kontrolne (testowane co partię za pomocą qPCR) w celu biologicznej walidacji wyników IP w kontekście specyficznym dla locus. Protokół qPCR i sekwencje starterów są dostarczane, umożliwiając badaczom walidację protokołów ChIP przy użyciu naszego przeciwciała w kontekście chromatyny. Każdy zestaw zawiera również ujemne przeciwciało kontrolne, aby zapewnić specyficzność reakcji ChIP.
Zestaw ChIPAb+ HDAC2 zawiera przeciwciało HDAC2, normalną mysią IgG i startery kontrolne, które amplifikują region 92 bp starterów ChIP, promotor VWF. HDAC2 i kontrole ujemne są dostarczane w skalowalnym rozmiarze reakcji "na ChIP" i mogą być wykorzystane do funkcjonalnej walidacji wytrącania chromatyny związanej z HDAC2.

~60 kDa

Immunogen

Epitop: C-terminus

Syntetyczny peptyd sprzężony z KLH (CEKTDTKGTKSEQLSNP) odpowiadający ludzkiemu HDAC2 na C-końcu.

Application

Immunoprecypitacja chromatyny:
Reprezentatywne dane partii.
Sonikowaną chromatynę przygotowaną z nietraktowanych lub poddanych działaniu promieniowania UV (6 godzin, 50 dżuli/m2) komórek U2OS (3 X 10E6 równoważników komórek na IP) poddano immunoprecypitacji chromatyny przy użyciu 2 µg normalnej mysiej IgG lub 2 µg anty-HDAC2 i zestawu Magna ChIP A/G (nr kat. 17-10085). Pomyślna immunoprecypitacja fragmentów DNA związanych z HDAC2 została zweryfikowana przez qPCR przy użyciu starterów ChIP, promotor VWF. Dane przedstawiono jako procentowy wkład każdej próbki IP w stosunku do chromatyny wejściowej dla każdego amplikonu i próbki ChIP, jak wskazano. (Rysunek 2).
Szczegółowe informacje dotyczące eksperymentu można znaleźć w protokole EZ-Magna ChIP A (nr kat. 17-408) lub EZ-ChIP (nr kat. 17-371).
Analiza Western Blot:
Reprezentatywne dane partii.
Ekstrakt jądrowy HeLa został rozdzielony przez elektroforezę, przeniesiony na nitrocelulozę i sondowany anty-HDAC2 (0,5 μg/ml). Białka wizualizowano przy użyciu koziego przeciwciała anty-mysiego sprzężonego z HRP i systemu detekcji chemiluminescencji.
Strzałka wskazuje HDAC2 (~60 kDa). (Rysunek 3).
Immunoprecypitacja i test HDAC:
Reprezentatywne dane partii.
3 μL poprzedniej partii użyto do immunoprecypitacji aktywności HDAC z ekstraktu jądrowego HeLa, którą następnie zmierzono przy użyciu zestawu HDAC Assay Kit (wykrywanie fluorometryczne) (nr katalogowy 17-356) (rysunek 4).

Zestaw ChIPAb+ HDAC2 -ChIP Validated Antibody & Primer Set zawiera przeciwciało i specyficzne kontrolne startery PCR.

Research Category
Epigenetics & Nuclear Function

Research Sub Category
Histones

Biochem/physiol Actions

Przewidywana reakcja krzyżowa ze szczurem na podstawie homologii sekwencji.

To przeciwciało rozpoznaje HDAC2 na C-końcu.

Packaging

25 testów w zestawie. Zalecane użycie: ~2 μg przeciwciała na immunoprecypitację chromatyny (w zależności od kontekstu biologicznego).

Physical form

Format: Oczyszczony

Przeciwciało anty-HDAC2 (mysie monoklonalne). Jedna fiolka zawierająca 50 µg oczyszczonej mysiej monoklonalnej IgG w buforze zawierającym 70% buforu do przechowywania (0,1 M Tris-glicyny, pH 7,4, 0,15 M NaCl, 0,05% azydku sodu) i 30% glicerolu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Stężenie: 0,94 mg/ml
Normalna mysia IgG. Jedna fiolka zawierająca 125 µg oczyszczonej mysiej IgG w 125 µl buforu do przechowywania zawierającego 0,1% azydku sodu. Przechowywać w temperaturze -20°C.
Primery ChIP, promotor VWF. Jedna fiolka zawierająca 75 μL po 5 μM każdego startera specyficznego dla regionu promotorowego ludzkiego czynnika von Willebranda. Przechowywać w temperaturze -20°C.
FOR: GCT GAG AGC ATG GCC TAG GGT GGT GGG CGG CAC
REV: CCC CTG CAA ATG AGG GCT GCG GCT ATC TCC AAG

Protein G Purified

Preparation Note

Przechowywać przez 1 rok w temperaturze -20°C od daty otrzymania. Zalecenia dotyczące postępowania: Po pierwszym rozmrożeniu, a przed zdjęciem korka, odwirować fiolkę i delikatnie wymieszać roztwór. Rozdzielić do probówek mikrowirówkowych i przechowywać w temperaturze -20°C. Unikać powtarzających się cykli zamrażania/rozmrażania, które mogą uszkodzić IgG i wpłynąć na działanie produktu.
Uwaga: Zmienność temperatur w zamrażarce poniżej -20°C może powodować zamarzanie roztworów zawierających glicerol podczas przechowywania.

Analysis Note

Kontrola
Zawiera normalną mysią IgG i startery specyficzne dla ludzkiego czynnika von Willebranda.

Chromatin Immunoprecipitation:
Representative lot data.
Sonicated chromatin prepared from HEK293T cells (5 X 10E6 cell equivalents per IP) were subjected to chromatin immunoprecipitation using 2 µg of either Normal Mouse IgG, or 2 µg of Anti-HDAC2 and the Magna ChIP^® A/G Kit (Cat. # 17-10085). Successful immunoprecipitation of HDAC2 associated DNA fragments was verified by qPCR using ChIP Primers, VWF promoter (Figure 1).
Please refer to the EZ-Magna ChIP A (Cat. # 17-408) or EZ-ChIP (Cat. # 17-371) protocol for experimental details

Other Notes

Stężenie: Stężenie specyficzne dla danej partii można znaleźć w certyfikacie analizy.

Legal Information

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.

Informacja o środkach bezpieczeństwa

• Klasa składowania: 10 - Combustible liquids
• wgk: WGK 1