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Possibilities and limitations of signal summing for an immunosuppressant LC-MS/MS method.

Analytical and bioanalytical chemistry (2015-06-15)
Steven Pauwels, Ivo Jans, Nele Peersman, Jaak Billen, Dirk Vanderschueren, Koen Desmet, Pieter Vermeersch
RESUMEN

Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) is the method of choice for quantifying small molecules in research and clinical setting. Although there is a large toolkit to increase quantification levels for LC-MS/MS, these techniques are sometimes insufficient to attain the needed limits of quantification (LOQs) or the method becomes too impractical for routine use. We examined the possibilities and limitations of signal summing, an under-utilized, easy-to-apply practice to increase LOQs for an immunosuppressant LC-MS/MS method. The limits of signal summing for everolimus were tested by running samples of everolimus at three concentrations in triplicate programming, increasing amounts of identical transitions in a constant cycle time up to the maximum number the software permitted to sum. The increase in peak area and the signal-to-noise ratio were determined. The effect on imprecision of peak areas and response ratios was evaluated by injection of a low concentration of everolimus tenfold using respectively one and five identical transitions, retaining an identical ion counting time. We compared the imprecision, LOQ, and recovery for our routine everolimus method (using one transition for everolimus and one for d3-everolimus) and an adapted method summing three identical transitions for everolimus (and one for d3-everolimus). The increase in signal was close to the theoretically expected one with a larger experimental spread for everolimus once more than five transitions were used. There was no clear beneficial effect of summing on imprecision. The adapted everolimus method showed a lower LOQ, but comparable imprecision and recovery as the routine method. Quantification levels can be improved by signal summing. No clear effect on imprecision was observed.

MATERIALES
Referencia del producto
Marca
Descripción del producto

Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, for molecular biology, ≥98%
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Sigma-Aldrich
Ammonium acetate solution, for molecular biology, 7.5 M
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Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, 99.999% trace metals basis
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Sigma-Aldrich
Acetonitrilo, anhydrous, 99.8%
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Sigma-Aldrich
Metanol, anhydrous, 99.8%
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Ácido fórmico, ≥95%, FCC, FG
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Acetonitrilo, electronic grade, 99.999% trace metals basis
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, reagent grade, ≥98%
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, BioXtra, ≥98%
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Methanol-12C, 99.95 atom % 12C
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Acetonitrilo, ≥99.5%, ACS reagent
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Acetonitrilo solution, contains 0.1 % (v/v) trifluoroacetic acid, suitable for HPLC
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Precio
Cantidad
Supelco
Methanol solution, contains 0.10 % (v/v) formic acid, UHPLC, suitable for mass spectrometry (MS), ≥99.5%
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Acetonitrilo solution, contains 0.1 % (v/v) formic acid, suitable for HPLC
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Metanol, HPLC Plus, ≥99.9%, poly-coated bottles
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Acetonitrilo, HPLC Plus, ≥99.9%, poly-coated bottles
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Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Acetonitrilo solution, contains 0.05 % (w/v) ammonium formate, 5 % (v/v) water, 0.1 % (v/v) formic acid, suitable for HPLC
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Acetonitrilo solution, contains 0.05 % (v/v) trifluoroacetic acid
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Acetonitrilo solution, contains 10.0% acetone, 0.05% formic acid, 40.0% 2-propanol
Número de referencia del producto (SKU)
Tamaño de envase
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Precio
Cantidad