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Merck

The cytoplasmic tail of FPC antagonizes the full-length protein in the regulation of mTOR pathway.

PloS one (2014-05-24)
Shixuan Wang, Maoqing Wu, Gang Yao, Jingjing Zhang, Jing Zhou
RESUMEN

FPC (fibrocystin or polyductin) is a single transmembrane receptor-like protein, responsible for the human autosomal recessive polycystic kidney disease (ARPKD). It was recently proposed that FPC undergoes a Notch-like cleavage and subsequently the cleaved carboxy(C)-terminal fragment translocates to the nucleus. To study the functions of the isolated C-tail, we expressed the intracellular domain of human FPC (hICD) in renal epithelial cells. By 3-dimensional (3D) tubulogenesis assay, we found that in contrast to tubule-like structures formed from control cells, hICD-expressing cells exclusively formed cyst-like structures. By western blotting, we showed that the Akt/mTOR pathway, indicated by increased phosphorylation of Akt at serine 473 and S6 kinase 1 at threonine 389, was constitutively activated in hICD-expressing cells, similar to that in FPC knockdown cells and ARPKD kidneys. Moreover, application of mTOR inhibitor rapamycin reduced the size of the cyst-like structures formed by hICD-expressing cells. Application of either LY294002 or wortmannin inhibited the activation of both S6K1 and Akt. Expression of full-length FPC inhibited the activation of S6 and S6 kinase whereas co-expression of hICD with full-length FPC antagonized the inhibitory effect of full-length FPC on mTOR. Taken together, we propose that FPC modulates the PI3K/Akt/mTOR pathway and the cleaved C-tail regulates the function of the full-length protein.

MATERIALES
Referencia del producto
Marca
Descripción del producto

Sigma-Aldrich
HEPES, ≥99.5% (titration)
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, for molecular biology, ≥99.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
HEPES, BioPerformance Certified, ≥99.5% (titration), suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, ≥99.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
DAPI, for nucleic acid staining
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, ≥99.5% (GC), BioXtra
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Acrilamida, suitable for electrophoresis, ≥99%
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Sigma-Aldrich
Yoduro de propidio, ≥94.0% (HPLC)
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USP
Sacarosa, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
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Sigma-Aldrich
HEPES, BioUltra, for molecular biology, ≥99.5% (T)
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Sigma-Aldrich
HEPES buffer solution, 1 M in H2O
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, ≥99.5% (GC), BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture
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Sigma-Aldrich
Acrilamida, for molecular biology, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, ≥99.5% (GC)
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SAFC
HEPES
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, ≥99.5% (GC), Grade II, suitable for plant cell culture
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Sigma-Aldrich
Acrilamida, suitable for electrophoresis, ≥99% (HPLC), powder
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Sigma-Aldrich
Acrylamide solution, 40%, suitable for electrophoresis, sterile-filtered
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Sigma-Aldrich
HEPES, BioXtra, suitable for mouse embryo cell culture, ≥99.5% (titration)
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, Grade I, ≥99% (GC), suitable for plant cell culture
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SAFC
HEPES
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, meets USP testing specifications
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Sigma-Aldrich
DL-Triptófano, ≥99% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
HEPES, BioXtra, pH 5.0-6.5 (1 M in H2O), ≥99.5% (titration)
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Sigma-Aldrich
DL-Triptófano, ≥99% (HPLC)
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Supelco
Sacarosa, Pharmaceutical Secondary Standard; Certified Reference Material
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Sigma-Aldrich
HEPES, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ≥99.5%
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Sigma-Aldrich
Propidium iodide solution
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Sigma-Aldrich
Sacarosa, ACS reagent
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