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Merck

Modes of TAL effector-mediated repression.

Nucleic acids research (2014-11-13)
Jeannette Werner, Manfred Gossen
RESUMEN

Engineered transcription activator-like effectors, or TALEs, have emerged as a new class of designer DNA-binding proteins. Their DNA recognition sites can be specified with great flexibility. When fused to appropriate transcriptional regulatory domains, they can serve as designer transcription factors, modulating the activity of targeted promoters. We created tet operator (tetO)-specific TALEs (tetTALEs), with an identical DNA-binding site as the Tet repressor (TetR) and the TetR-based transcription factors that are extensively used in eukaryotic transcriptional control systems. Different constellations of tetTALEs and tetO modified chromosomal transcription units were analyzed for their efficacy in mammalian cells. We find that tetTALE-silencers can entirely abrogate expression from the strong human EF1α promoter when binding upstream of the transcriptional control sequence. Remarkably, the DNA-binding domain of tetTALE alone can effectively counteract trans-activation mediated by the potent tettrans-activator and also directly interfere with RNA polymerase II transcription initiation from the strong CMV promoter. Our results demonstrate that TALEs can act as highly versatile tools in genetic engineering, serving as trans-activators, trans-silencers and also competitive repressors.

MATERIALES
Referencia del producto
Marca
Descripción del producto

Sigma-Aldrich
Glicerol, ACS reagent, ≥99.5%
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicerol, for molecular biology, ≥99.0%
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Disponibilidad
Precio
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Sigma-Aldrich
Glicerol, ReagentPlus®, ≥99.0% (GC)
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Sigma-Aldrich
Dodecilsulfatosódico, BioReagent, suitable for electrophoresis, for molecular biology, ≥98.5% (GC)
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Sigma-Aldrich
Dodecilsulfatosódico, ≥99.0% (GC), dust-free pellets
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Sigma-Aldrich
Sodium dodecyl sulfate solution, BioUltra, for molecular biology, 10% in H2O
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Sigma-Aldrich
BIS-TRIS, ≥98.0% (titration)
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Sigma-Aldrich
Sodium dodecyl sulfate solution, BioUltra, for molecular biology, 20% in H2O
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Sigma-Aldrich
Glicerol solution, 83.5-89.5% (T)
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid solution, 0.02% in DPBS (0.5 mM), sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Glicerol, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for electrophoresis, ≥99% (GC)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicerol, BioUltra, for molecular biology, anhydrous, ≥99.5% (GC)
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
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Sigma-Aldrich
Dodecilsulfatosódico, BioUltra, for molecular biology, ≥99.0% (GC)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, anhydrous, crystalline, BioReagent, suitable for cell culture
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Sigma-Aldrich
Glicerol, puriss., anhydrous, 99.0-101.0% (alkalimetric)
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, 99.995% trace metals basis
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USP
Glicerol, United States Pharmacopeia (USP) Reference Standard
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Sigma-Aldrich
Glicerol, puriss. p.a., ACS reagent, anhydrous, dist., ≥99.5% (GC)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Glicerol, FCC, FG
Número de referencia del producto (SKU)
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Cantidad
Supelco
Dodecilsulfatosódico, dust-free pellets, suitable for electrophoresis, for molecular biology, ≥99.0% (GC)
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Cantidad
Sigma-Aldrich
BIS-TRIS, BioUltra, ≥99.0% (NT)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Dodecilsulfatosódico, ≥98.0% (GC)
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
BIS-TRIS, BioPerformance Certified, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, ≥98.0%
Número de referencia del producto (SKU)
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Disponibilidad
Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Dodecilsulfatosódico, ACS reagent, ≥99.0%
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Sigma-Aldrich
Ethylenediaminetetraacetic acid, ACS reagent, 99.4-100.6%, powder
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Sigma-Aldrich
BIS-TRIS, BioXtra, ≥98.0% (titration)
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SAFC
BIS-TRIS
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Sigma-Aldrich
Glicerol, ≥99.5%
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Cantidad
Sigma-Aldrich
Dodecilsulfatosódico, ReagentPlus®, ≥98.5% (GC)
Número de referencia del producto (SKU)
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Precio
Cantidad
Sigma-Aldrich
Bromophenol Blue, titration: suitable
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