Culture de cellules microbiennes

Clonage et expression de protéines recombinantes

Les cultures bactériennes sont utilisées pour l'expression de protéines recombinantes, le clonage et l'amplification de plasmides, le clonage de chromosomes artificiels bactériens (BAC pour Bacterial Artificial Chromosome) et le clonage de cosmides. Les cellules bactériennes peuvent être altérées pour absorber et incorporer des gènes exogènes et des plasmides par le biais d'une transformation. La transformation des cellules compétentes se fait typiquement par l'application d'une électroporation ou d'un choc thermique à des cellules compétentes traitées chimiquement.

Les bactéries transformées sont ensuite identifiées et sélectionnées sur la base d'une antibiorésistance acquise, conférée par de l'ADN plasmidique recombinant, ou en utilisant un criblage "bleu-blanc" pour identifier les bactéries recombinantes exprimant la β-galactosidase comme marqueur. Les levures peuvent également être transformées en utilisant l'électroporation et d'autres méthodes pour des essais avec double hybride de levure et gène rapporteur pour l'étude de l'expression protéique et des interactions des protéines.

Culture en vue de l'isolement et l'identification des microbes

Les cultures microbiennes sont importantes sur le plan médical pour l'isolement, la détection et la différenciation des bactéries et autres microbes responsables de maladies infectieuses. La caractérisation et l'identification à l'aide de méthodes de culture s'appuient à la fois sur le phénotype et le génotype microbiens. Les cellules peuvent être isolées par inoculation d'une boîte d'ensemencement pour produire des colonies pures. Les milieux sélectifs sont utilisés pour inhiber la croissance de certains groupes de microbes, en permettant à d'autres de croître. Les milieux différentiels contiennent des composés qui permettent de distinguer visuellement les microbes d'après l'aspect de leurs colonies ou d'après les changements du milieu environnant résultant de différences au niveau de l'activité métabolique ou hémolytique. Ces milieux contribuent à l'identification des bactéries et autres microbes par la différenciation et l'élimination.