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免疫检测试剂和底物

Immobilon® Forte、 Crescendo和 Classico 化学发光蛋白质印迹法底物

在蛋白质免疫印迹检测中,决定实验成败的最重要因素是所用试剂的质量。我们提供一系列经过充分优化的蛋白质免疫印迹检测试剂,可协同工作发挥作用,提供强特异性信号和低背景,帮助您快速获得发表级结果。

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相关产品资源


阻断剂

阻断未结合的膜位点可避免抗体非特异性结合,防止高背景。传统的牛奶、明胶和其他基于蛋白质的阻断剂适用于许多印迹应用,但可能屏蔽信号或干扰特定蛋白质靶标检测,导致灵敏度或检出率下降。Immobilon®阻断降噪试剂包含经过充分优化的无蛋白即用型缓冲液,可降低化学发光、荧光或磷蛋白检测应用的背景水平。

Western Blot封闭剂选择指南

链霉亲和素和二抗偶联物

现代化的免疫检测方法基于酶联检测,使用与辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)等酶共价结合的偶联酶的链霉亲和素和二抗。偶联的酶可催化特定底物降解,产生信号。现有多种链霉亲和素、蛋白A、蛋白G和二抗偶联物可供蛋白质免疫印迹使用。我们提供大量HRP和AP底物选择,用于蛋白印迹法中的化学发光、显色和比色检测。

用于蛋白质印迹中的化学发光底物

Immobilon® 化学发光检测用HRP底物针对更多定量印迹提高了灵敏度,且通过降低检测用抗体的浓度降低了成本。根据不同灵敏度,在一系列Immobilon®便捷即用型或两种组分形式底物中进行选择 ,以优化用于蛋白质印迹应用的检测。

  • Immobilon®Classico、Crescendo和Forte化学发光底物 包含一系列预混即用型过氧化物酶检测试剂,并提供了多种灵敏度选择,可在一系列目标蛋白浓度范围内提供理想的信噪比。检测限制
    • Immobilon® Classico: ~ 6 pg 目标蛋白
    • Immobilon® Crescendo: ~ 1-3 pg 目标蛋白
    • Immobilon® Forte: ~ 400 fg 目标蛋白
       
  • Immobilon® Western HRP、Immobilon® ECL Ultra和Immobilon® UltraPlus Western底物具有优异的灵敏度,信号持续时间长,为标准的双组分形式。适合使用稀释度更高的一抗溶液进行免疫印迹检测。检测限制
    • Immobilon® Western HRP底物: ~ 400 fg 目标蛋白
    • Immobilon® ECL Ultra底物:低飞克范围
    • Immobilon® ECL UltraPlus Western Blot HRP底物:低飞克范围

Immobilon®化学发光HRP底物的相对灵敏度

2倍稀释法说明Immobilon®化学发光底物在蛋白质印迹分析中的灵敏度,包括:Classico(低灵敏)、Crescendo、Forte、Ultra和UltraPlus(最高灵敏度)。

图 1.将来自A431细胞裂解物[12-110]的4 μg蛋白进行2倍梯度稀释,在10% mPAGE®凝胶上跑胶,电泳条件:MOPS缓冲液[MPM0PS],200V、25分钟。使用Immobilon®-P膜[IPVH00010]、mPAGE®转移缓冲液[MPTRB]+10%乙醇转移1小时。用兔抗HH3[H0164]和山羊抗兔[AP132P]抗体按照图中的稀释度免疫检测HH3蛋白(15 kDa)。用提到的ECL试剂孵育印迹5分钟,在Bio-Rad® ChemiDoc系统上按30s曝光采集图像。

Cytiva™ Amersham™ ECL检测试剂采用增强型鲁米诺HRP检测,使用不同配方来覆盖不同的蛋白质印迹应用的需要。 

  • Cytiva Amersham™ ECL蛋白质印迹试剂推荐用于验证性的蛋白质印迹应用。
  • Cytiva Amersham™ ECL Prime蛋白质印迹检测试剂可在同一次印迹中同时检测高丰度和低丰度蛋白质。
  • Cytiva Amersham™ ECL Select蛋白质印迹检测试剂即使使用稀释的一级和二级抗体也具有很高的灵敏度。
  • Cytiva Amersham™ ECL Start蛋白印迹检测试剂用于中、高表达蛋白的化学发光检测。

用于蛋白质印迹中的显色底物

显色检测利用过氧化物酶(如,HRP)或碱性磷酸酶(AP)结合酶来催化不溶性有色沉淀物的沉积反应,用以进行检测。我们的蛋白质印迹显色底物有溶液、粉末和片剂三种形式,为储存和使用提供了灵活的选择。

  • SIGMAFAST™ DAB片剂(显色HRP底物)由比色沉淀底物组成,与辣根过氧化物酶反应时呈褐色,可水溶制备即用型印迹检测缓冲溶液。
  • BCIP/NBT(蓝色/紫色)和BCIP/TNBT(蓝色/棕色)单一组分试剂(显色AP底物)是碱性磷酸酶的高灵敏度比色底物。
  • TMB增强型单组分HRP膜底物(显色HRP底物)是一种比色底物,可形成深蓝色产物。

信号增强剂

  • Immobilon® 信号增强剂适用于信号强度较低的蛋白质免疫印迹应用。通过增强抗体-抗原反应,可使信号强度增加2到10倍。Immobilon®信号增强剂兼容PVDF和硝酸纤维素膜,适用于比色、化学发光和荧光检测方法。
  • SignalBoost™免疫反应增强剂试剂盒可增强硝酸纤维素或PVDF膜上的化学发光或比色靶标信号

用于抗体剥离和重新检测的试剂和试剂盒

专为从蛋白质免疫上快速有效去除抗体而设计的抗体剥离和重新结合试剂,不会对固定蛋白质产生任何明显影响。

  • ReBlot™ Plus试剂可高效剥离结合抗体的检测印迹。ReBlot™ Plus试剂提供温和与强效两种配方。


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