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Merck

CenH3-Independent Kinetochore Assembly in Lepidoptera Requires CCAN, Including CENP-T.

Current biology : CB (2020-02-08)
Nuria Cortes-Silva, Jonathan Ulmer, Takashi Kiuchi, Emily Hsieh, Gaetan Cornilleau, Ilham Ladid, Florent Dingli, Damarys Loew, Susumu Katsuma, Ines A Drinnenberg
ZUSAMMENFASSUNG

Accurate chromosome segregation requires assembly of the multiprotein kinetochore complex at centromeres. In most eukaryotes, kinetochore assembly is primed by the histone H3 variant CenH3 (also called CENP-A), which physically interacts with components of the inner kinetochore constitutive centromere-associated network (CCAN). Unexpectedly, regarding its critical function, previous work identified that select eukaryotic lineages, including several insects, have lost CenH3 while having retained homologs of the CCAN. These findings imply alternative CCAN assembly pathways in these organisms that function in CenH3-independent manners. Here we study the composition and assembly of CenH3-deficient kinetochores of Lepidoptera (butterflies and moths). We show that lepidopteran kinetochores consist of previously identified CCAN homologs as well as additional components, including a divergent CENP-T homolog, that are required for accurate mitotic progression. Our study focuses on CENP-T, which we found to be sufficient to recruit the Mis12 and Ndc80 outer kinetochore complexes. In addition, CRISPR-mediated gene editing in Bombyx mori establishes an essential function of CENP-T in vivo. Finally, the retention of CENP-T and additional CCAN homologs in other independently derived CenH3-deficient insects indicates a conserved mechanism of kinetochore assembly between these lineages. Our study provides the first functional insights into CCAN-based kinetochore assembly pathways that function independently of CenH3, contributing to the emerging picture of an unexpected plasticity to build a kinetochore.

MATERIALIEN
Produktnummer
Marke
Produktbeschreibung

Sigma-Aldrich
Monoklonaler ANTI-FLAG® M2-Antikörper in Maus hergestellte Antikörper, 1 mg/mL, clone M2, affinity isolated antibody, buffered aqueous solution (50% glycerol, 10 mM sodium phosphate, and 150 mM NaCl, pH 7.4)
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Millipore
Anti-FLAG® M2 Magnetperlen, affinity isolated antibody
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Sigma-Aldrich
DAPI, for nucleic acid staining
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Sigma-Aldrich
3X FLAG® Peptid, lyophilized powder
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Sigma-Aldrich
Jodacetamid, ≥99% (NMR), crystalline
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
KOD One PCR Master-Mix -BLAU-, Ready-to-use 2X hot-start PCR master mix with a modified KOD DNA polymerase optimized for ultra-fast and convenient high-fidelity PCR
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Sigma-Aldrich
KOD One PCR Master-Mix, Ready-to-use 2X hot-start PCR master mix with a modified KOD DNA polymerase optimized for ultra-fast and convenient high-fidelity PCR
Preise und Verfügbarkeit sind derzeit nicht verfügbar.
Sigma-Aldrich
Desoxyribonukleinsäure mit niedriger Molekülmasse aus Lachssperma
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Sigma-Aldrich
Nuclease mikrokokkal aus Staphylococcus aureus, 100-300 units/mg protein
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Sigma-Aldrich
Anti-phospho Histone H3 (Ser10), clone 6G8B7 Antibody, clone 6G8B7, 1 mg/mL, from rat
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Sigma-Aldrich
Ammoniumbicarbonat, BioUltra, ≥99.5% (T)
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Sigma-Aldrich
pRSFDuet-1 DNA - Novagen
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Supelco
N-(Propionyloxy)-succinimid, for LC-MS derivatization, LiChropur, ≥95% (HPLC)
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