Prüfung auf Pyrogene
Die Prüfung auf Pyrogene ist ein entscheidender Schritt zur Gewährleistung der Sicherheit von parenteralen Arzneimitteln und Medizinprodukten. Sie ist Teil der zwingend erforderlichen Freigabetests, damit lebensbedrohliche Fieberreaktionen durch pyrogene Substanzen vermieden werden. Der Monozyten-Aktivierungstest (MAT) kann sowohl Endotoxine als auch Nicht-Endotoxin-Pyrogene in einem einzigen In-vitro-Test nachweisen.
Abschnitte
Monozyten-Aktivierungstest (MAT)
Für den Nachweis von Endotoxinen und Nicht-Endotoxin-Pyrogenen in parenteralen Produkten wie Arzneimitteln oder medizinischen Produkten konzipiert, bietet der MAT eine regulatorisch konforme In-vitro-Alternative zu konventionellen Tierversuchen.
Für den Pyrogen-Nachweis wird häufig der Kaninchen-Pyrogentest und der Limulus-Amöbozyten-Lysat-Test (LAL) Test verwendet. Bei beiden Methoden werden Tiere eingesetzt und sie weisen einige Einschränkungen auf. Der Kaninchen-Pyrogentest weist einen Mangel an Robustheit auf, da eine Tierreaktion stark von einer menschlichen Reaktion abweichen kann. Im LAL-Test werden ausschließlich Endotoxine nachgewiesen, was ein Sicherheitsrisiko darstellt, da Nicht-Endotoxin-Pyrogene, die in der getesteten Probe vorhanden sein könnten, nicht erfasst werden.
Um diese Einschränkungen zu überwinden, wurde 2010 der Monozyten-Aktivierungstest (MAT) als Arzneibuchmethode in das Europäische Arzneibuch aufgenommen, um den Kaninchen-Pyrogentest zu ersetzen (EP Kapitel 2.6.30). Er wird ebenfalls in den FDA-Leitlinien für die Industrie erwähnt.
Hinweis: Die Europäische Arzneibuchkommission hat beschlossen, den Kaninchen-Pyrogentest in Übereinstimmung mit dem 3R-Prinzip abzuschaffen, wobei der MAT als die am besten geeignete Alternative erachtet wird.
Lesen Sie den Artikel und besprechen Sie sich hierzu mit unseren Experten, um eine Umstellung einzuleiten.
PyroMAT® In-vitro-Test zum Nachweis von Endotoxinen und Nicht-Endotoxin-Pyrogenen
Das PyroMAT®-System basiert auf der Mono-Mac-6-Zelllinie und der IL-6-Auslesung. Es bietet alle Vorzüge des Monozyten-Aktivierungstests kombiniert mit den Vorteilen der Anwendung von Zelllinien.
- Nachweis eines breiten Spektrums an Pyrogenen: Die Patientensicherheit ist gewährleistet, wenn das volle Spektrum an Pyrogenen getestet wird. Wie der Kaninchen-Pyrogentest (RPT) ist der MAT sowohl für den Nachweis von Endotoxinen als auch von Nicht-Endotoxin-Pyrogenen geeignet.
- Mehr Produktarten, die getestet werden können: Die gebräuchlichsten Methoden, der RPT und der bakterielle Endotoxintest (BET oder LAL), sind auf die Produktarten beschränkt, die mit ihnen getestet werden können. Der MAT bietet mehr Flexibilität in Bezug auf seine Anwendungen.
- Ein In-vitro-Assay, der die humane Immunantwort imitiert: Bietet ein robustes prädiktives Modell, das die Anwendung von Tierversuchen reduziert.
- Konformität mit internationalen Vorschriften und Richtlinien: In Einklang mit ethischen Trends der Industrie und Aufsichtsbehörden zur Reduzierung von Tierversuchen.
- Standardisierte Reaktivität und hohe Empfindlichkeit (NWG 0,05 EU/ml). Arbeitserleichterung durch eine gebrauchsfertige Zelllinie, die aufwändige Laborarbeiten und die Notwendigkeit eines Zellkulturlabors eliminiert.
- Qualifizierte Zellen: Die Mono-Mac-6-Zellen sind nicht nur in der internationalen Validierung des MAT zitiert, sondern auch für die Expression aller Toll-ähnlichen Oberflächenrezeptoren (TLR) qualifiziert, um den Nachweis eines breiten Spektrums von Pyrogenen zu gewährleisten.
Erfahren Sie mehr über Positivkontrollen für Nicht-Endotoxin-Pyrogene
Positivkontrollen für Nicht-Endotoxin-Pyrogene
Im Europäischen Arzneibuch Kapitel 2.6.30 (Monozyten-Aktivierungstest) wird verlangt, dass die vorbereitenden Tests „mindestens 2 Nicht-Endotoxin-Liganden für Toll-like-Rezeptoren [...]" umfassen. Die Auswahl der verwendeten Nicht-Endotoxin-Pyrogene soll die wahrscheinlichste(n) Kontamination(en) der zu untersuchenden Zubereitung widerspiegeln.“
Um dieser Anforderung gerecht zu werden, bieten wir eine erweiterte Palette von Positivkontrollen an:
- Sie spiegeln verschiedene Arten von Verunreinigungen wider, die üblicherweise in pharmazeutischen Produktionsprozessen vorkommen (gramnegative und grampositive Bakterien, Viren und Mykoplasmen).
- Verschiedene monozytäre Toll-like-Rezeptoren (TLR) als Target
Erfahren Sie mehr über Positivkontrollen für Nicht-Endotoxin-Pyrogene.
- Nachweis eines breiten Pyrogen-Spektrums: Wie der Kaninchen-Pyrogentest (RPT) weist der MAT sowohl Endotoxine als auch NEP nach.
- Erweitertes Spektrum an Produkten, die getestet werden können: Die gebräuchlichsten Methoden, der RPT und der bakterielle Endotoxintest (BET oder LAL), sind durch ihre Anwendung auf nur bestimmte Produktarten in ihrer Anwendung limitiert. Der MAT bietet mehr Flexibilität in Bezug auf die Anwendungen.
- Ein In-vitro-Assay, der die humane Immunantwort imitiert: Bietet ein robustes prädiktives Modell, das die Anwendung von Tierversuchen reduziert.
- Konformität mit internationalen Vorschriften und Richtlinien: In Einklang mit ethischen Trends der Industrie und Aufsichtsbehörden zur Reduzierung von Tierversuchen.
- Kryokonserviertes Blut von 8 Spendern gepoolt: Um die menschliche Immunreaktion auf Pyrogene bestmöglich zu imitieren.
Optimieren oder vereinfachen Sie mit unseren Serviceangeboten Ihre Pyrogen-Prüfverfahren für eine einfache Validierung und kosteneffiziente Testung:
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Zugehörige Produktinformationen
- Brochure: PyroMAT® and PyroDetect
Used to detect a broad range of pyrogens in parenteral products such as pharmaceuticals, biopharmaceuticals or medical devices, the MAT gives an in vitro alternative to conventional animal testing in accordance with regulatory guidelines.
- Article: Pyrogen Contamination Risk by Dr. Tim Sandle
Unlike the LAL test, the MAT is a powerful in vitro test for the detection of both endotoxin and non-endotoxin pyrogens (NEPs) acting via the toll-like receptors (TLRs) pathway.
- Data Sheet: Validation Method - PyroMAT® System
The Monocyte Activation Test (MAT) was introduced in the European Pharmacopeia (Chapter 2.6.30) in 2010, as a compendial method that can be used to replace the Rabbit Pyrogen Test (RPT).
- Infographic: MAT Implementation Workflow
Implementation of our Monocyte Activation Test (MAT), the PyroMAT® system.
- Poster: Pyrogen Detection in Pharma QC: Moving Away from the RPT
We have demonstrated that the MM6 cells are suitable for the detection of various NEPs targeting different monocytic toll-like receptors, making MM6 cell line-based MAT suitable for RPT replacement.
- Application Note: Detection of NEP by MAT Using the PyroMAT® System
The monocyte activation test (MAT) is the human in vitro alternative to the rabbit pyrogen test, and allows the detection of the full range of pyrogens, including endotoxins and non-endotoxin pyrogens (NEPs).
- Application Note: Detection of Pyrogens in Vaccines with PyroMAT® System
The PyroMAT® System uses cryo-preserved Mono-Mac-6 (MM6) human monocytic cells as a source of monocytes. The response to pyrogenic substances is determined by measurement of Interleukin-6 (IL-6) produced by the MonoMac 6 cells.
- Questions & Answers about MAT. Dr. Tim Sandle Reponds
Risk considerations for the presence of pyrogens and the need for the MAT test in pharmaceutical processing.
- White Paper: Monocyte Activation Test
In this context, the in vitro pyrogen test based on human cells offers a valuable alternative to the rabbit pyrogen test.
- Application Note: Detection of Pyrogens in Hormone-based Drugs
For the quantification of the pyrogenic load of a sample, method A in accordance with the European Pharmacopeia can be conducted.
- Application Note: Detection of Pyrogens in FBS with PyroMAT® System
The response to pyrogenic substances is determined by measurement of Interleukin-6 (IL-6) produced by the Mono-Mac-6 cells. For this purpose, the ELISA-microplate supplied in the kit is coated with an antibody specific to IL-6.
Zugehörige Videos
Webinare zu diesem Thema
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