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ホーム定量PCR(qPCR)モレキュラービーコン

モレキュラービーコン

モレキュラービーコンは、分子生物学および遺伝学研究に用いられるオリゴヌクレオチドプローブ(30~50塩基の短い一本鎖核酸配列)の一種です。モレキュラービーコンは間接リピートに隣接して独自の配列を有するよう設計されており、それによりステム-ループ構造を形成して5'末端と3'末端が近い位置に存在するようになっています。モレキュラービーコンプローブはターゲットにハイブリダイズすると蛍光を発します。この構造化プローブは高感度で配列特異性が高く、qPCRやin vitro研究での配列検出に使用されます。

モレキュラービーコンの構造と機能

モレキュラービーコンは、プローブの両端で相補的なステムシーケンス(約4~6 nt)によってヘアピンループコンフォメーション(約20~25 ntが最も一般的)が保持された、一本鎖両末端標識蛍光プローブです。プローブの5'末端と3'末端にはそれぞれレポーター、クエンチャー分子があります。ループは、標的配列に相補的な一本鎖DNA配列です。レポーター(フルオロフォア、または蛍光色素)とクエンチャーが近接しているため、エネルギー移行を誘発し、レポーターの自然な蛍光発光が消光します。モレキュラービーコンの構造と仕組みは以下の通りです(図1)。


モレキュラービーコンのデザインと機能

  • モレキュラービーコンプローブは、ループ、ステム、クエンチャー、レポーターの4つの不可欠なパーツで設計されています
  • モレキュラービーコンのステムとループの領域が安定したヘアピン構造を形成し、フルオロフォアとクエンチャーが近接した位置にあります。この近接性により、フルオロフォアが発光した蛍光をクエンチャーが吸収し、効果的にシグナルが抑制されます。
  • モレキュラービーコンが相補的なターゲットシーケンスに遭遇すると、ヘアピンループ構造が開き、5'末端のレポーターを3'末端のクエンチャーから分離させます。クエンチャーがレポーターから離れることで、レポーターの蛍光が消光されなくなり、それによって蛍光発光が起きます。 
  • 蛍光シグナルの強度は、サンプルに存在する標的DNAの量に正比例します。
  • リアルタイムPCRにおいて、モレキュラービーコンが増幅前に添加されると、ステムの塩基ペアリングが阻害されます。これにより、レポーター色素とクエンチャーが分離する変性時にプローブが相補的ターゲットにハイブリダイズすることで、レポーター色素の蛍光発光が誘導されます。
未結合ビーコンおよび結合ビーコンと蛍光消光

図1.モレキュラービーコンの働き


モレキュラービーコンを使用することの利点

  • 特異性と感度の向上
  • リアルタイム検出性能
  • 一塩基多型(SNP)プロファイリングに最適

ビーコンプローブへのLocked Nucleic Acid™(LNA®)挿入

  • 熱安定性とハイブリダイゼーション特異性の向上
  • SNP検出、対立遺伝子識別、 in vitro 定量化または検出での精度向上
  • 困難なターゲットシーケンスに対して、より高感度のプローブを容易に設計できます

製品の特徴

  • 保証収量1、3、5、10 OD
  • 精製:HPLC
  • シーケンス長:15~40塩基
  • 品質管理:100% 質量分析
  • 納品形態:乾燥状態、褐色チューブで納品
  • カスタムフォーマットも可能(ノーマライゼーション、特殊プレートなど)

メルクのプローブは、実験計画を簡素化する形態でお届けしています。

モレキュラービーコンのアプリケーション

  • SNP検出
  • 対立遺伝子の識別
  • 病原体検出
  • マルチプレックス
  • ウイルス量の定量化
  • 遺伝子発現解析
  • 遺伝子コピー決定
  • エンドポイントジェノタイピング
  • In vitro定量または検出

保証収量

*1 ODが3 nmolまたは32 µgに相当します。概算反応数は、25 µL/200 nM反応を行った場合(5.0 pmol/反応)に基づく推定値です。評価は平均シーケンス長30塩基に基づいています。

一般的な蛍光色素分子とクエンチャーの組み合わせを以下に示します。

スペクトル特性表

出荷スケジュール

*納品は国際輸送、通関の遅れなどの理由により遅れる場合があります。大規模プロジェクトは、プロジェクトのニーズに基づいて納品スケジュールに組み込まれます。

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