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Nature Methodsでメルクのアプリケーションノートをお読みください！
http://www.nature.com/app_notes/nmeth/2012/121007/pdf/an8620.pdf
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メルクのLentiBriteレンチウイルスバイオセンサーの優位性について詳細をご確認ください！ここをクリック
バイオセンサーは、生きた状態の細胞に特定のタンパク質が含まれるかどうかを検出するだけでなく、そのタンパク質の細胞内部位を検出するためにも使用できます。細胞内目標タンパク質を可視化するための手法としては、蛍光顕微鏡検査あるいは低速度撮影ビデオキャプチャのいずれにおいても蛍光標識がよく用いられます。生細胞を破壊せずに可視化できれば、研究者はリアルタイムで細胞の状態を観察できるようになります。
レンチウイルスベクターシステムは、遺伝子産物を細胞に導入するために幅広く使用されている研究用ツールです。レンチウイルストランスフェクションは、化学に基づくトランスフェクションなどの非ウイルス的な手法、例えば分裂／非分裂細胞の高効率トランスフェクション、導入遺伝子の長期安定発現、および低免疫原性などよりも優れています。
EMD Millipore は、LentiBriteレンチウイルスバイオセンサーをご紹介しています。これは、生細胞および in vitro 分析においてさまざまな細胞／疾患状態下で可視化を行うための、オートファジー、アポトーシス、および細胞構造に関連する重要で基本的なタンパク質をコードするパッケージ済みのレンチウイルス粒子製品群です。
EMD Millipore’ の LentiBrite PSD-95-GFP レンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、神経細胞の PSD ダイナミクスの生細胞分析が行えます。
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バイオセンサーは、生きた状態の細胞に特定のタンパク質が含まれるかどうかを検出するだけでなく、そのタンパク質の細胞内部位を検出するためにも使用できます。細胞内目標タンパク質を可視化するための手法としては、蛍光顕微鏡検査あるいは低速度撮影ビデオキャプチャのいずれにおいても蛍光標識がよく用いられます。生細胞を破壊せずに可視化できれば、研究者はリアルタイムで細胞の状態を観察できるようになります。
レンチウイルスベクターシステムは、遺伝子産物を細胞に導入するために幅広く使用されている研究用ツールです。レンチウイルストランスフェクションは、化学に基づくトランスフェクションなどの非ウイルス的な手法、例えば分裂／非分裂細胞の高効率トランスフェクション、導入遺伝子の長期安定発現、および低免疫原性などよりも優れています。
EMD Millipore は、LentiBriteレンチウイルスバイオセンサーをご紹介しています。これは、生細胞および in vitro 分析においてさまざまな細胞／疾患状態下で可視化を行うための、オートファジー、アポトーシス、および細胞構造に関連する重要で基本的なタンパク質をコードするパッケージ済みのレンチウイルス粒子製品群です。
- パッケージ済み、GFP&、RFP を用いた蛍光タグ付き
- 従来の化学ベースのトランスフェクション法やその他のウイルス以外のトランスフェクション法と比較してトランスフェクション効率が高い
- 分裂細胞、非分裂細胞、および初代細胞または幹細胞などのトランスフェクションが困難な細胞にもトランスフェクト可能
- 細胞機能を破壊しない
EMD Millipore’ の LentiBrite PSD-95-GFP レンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、神経細胞の PSD ダイナミクスの生細胞分析が行えます。
興奮性シナプスのシナプス後側には、電子密度とタンパク質密度の高い領域であるシナプス後膜肥厚（PSD）があり、PSDは神経伝達物質をシナプス前神経伝達物質放出部位に隣接させ、シグナル伝達分子を濃縮します。 MAGUK（膜結合型グアニル酸キナーゼ）は、PSDの中心的なオーガナイザーとして、そしてシグナル伝達分子として機能します。 このようなMAGUKの1つであるPSD-95は、成熟シナプスの樹状突起棘に結合しており、他のMAGUKと比較して相対的に動きません。 蛍光タンパク質と融合させたPSD-95は、PSD-95の代謝回転と移動度の定量に利用されています。
EMD Millipore’のLentiBrite PSD-95-GFPレンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、神経細胞のPSDダイナミクスの生細胞分析が行えます。
EMD Millipore’のLentiBrite PSD-95-GFPレンチウイルス粒子では、明るい蛍光と正確な位置決定が得られ、神経細胞のPSDダイナミクスの生細胞分析が行えます。
アプリケーション
蛍光顕微鏡イメージング：
初代ラット海馬ニューロン細胞を、ポリ-D-リジンでコーティングしたチャンバー付きカバーガラスに5日間プレーティングし、MOI＝20で24時間レンチウイルス粒子を形質導入しました。 培地交換後、さらに2週間培養して、油浸広視野蛍光顕微鏡により細胞を生きた状態でイメージングしました。 神経突起に沿って点状に分布する PSD95-GFP が確認できます。
免疫細胞化学的比較：
ラット海馬ニューロン細胞をチャンバースライドにプレーティングし、MOI＝40 で 24 時間レンチウイルス粒子を形質導入しました。 24 時間後に培地を交換してから、細胞をさらに 2 週間培養しました。 同じ視野を PSD95 に対するモノクローナル抗体（カタログ番号 MAB1596）で免疫細胞化学染色（赤）すると、GFP-タンパク質（緑）と同様の発現パターンが確認されます。
最適な蛍光の可視化のため、最適な生細胞分析のために、トランスフェクション／感染後 24 ～ 48 時間以内に標的発現レベルを分析することをお勧めします。これは、特にトランスフェクトが困難な細胞株では蛍光強度が経時的に低下する可能性があるためです。感染細胞は、トランスフェクション／インフェクションが正常終了したら凍らせて、さらに培養液中で融解すれば、24～48時間が経過しても陽性蛍光発現が維持されます。 蛍光発現の長さと強度は、細胞株によって異なります。トランスフェクションが困難な細胞株には、より高いMOIが必要になる場合があります。
初代ラット海馬ニューロン細胞を、ポリ-D-リジンでコーティングしたチャンバー付きカバーガラスに5日間プレーティングし、MOI＝20で24時間レンチウイルス粒子を形質導入しました。 培地交換後、さらに2週間培養して、油浸広視野蛍光顕微鏡により細胞を生きた状態でイメージングしました。 神経突起に沿って点状に分布する PSD95-GFP が確認できます。
免疫細胞化学的比較：
ラット海馬ニューロン細胞をチャンバースライドにプレーティングし、MOI＝40 で 24 時間レンチウイルス粒子を形質導入しました。 24 時間後に培地を交換してから、細胞をさらに 2 週間培養しました。 同じ視野を PSD95 に対するモノクローナル抗体（カタログ番号 MAB1596）で免疫細胞化学染色（赤）すると、GFP-タンパク質（緑）と同様の発現パターンが確認されます。
最適な蛍光の可視化のため、最適な生細胞分析のために、トランスフェクション／感染後 24 ～ 48 時間以内に標的発現レベルを分析することをお勧めします。これは、特にトランスフェクトが困難な細胞株では蛍光強度が経時的に低下する可能性があるためです。感染細胞は、トランスフェクション／インフェクションが正常終了したら凍らせて、さらに培養液中で融解すれば、24～48時間が経過しても陽性蛍光発現が維持されます。 蛍光発現の長さと強度は、細胞株によって異なります。トランスフェクションが困難な細胞株には、より高いMOIが必要になる場合があります。
研究カテゴリー
神経科学
神経科学
研究サブカテゴリー
シナプス&およびシナプス生物学
シナプス&およびシナプス生物学
構成
TagPSD95-GFP2 レンチウイルス：
25 µLの最低3 x 10E8感染単位（IFU）/mLのレンチウイルス粒子1バイアル。 ロットに固有の力価情報については、データシートの“ウイルス力価”をご覧ください。
プロモーター
EF-1（伸長因子-1）
感染多重度（MOI）
MOI = 感染させた細胞数に対する感染性レンチウイルス粒子数（IFU）の比
高い形質導入効率およびシグナル強度を達成するためのニューロンに対する典型的なMOI値は、20～40の範囲です。 この目標に対して、一部の神経細胞タイプはより高いまたはより低いMOを必要とする場合があります
注：望ましい形質導入効率およびシグナル強度を達成するために、各細胞型およびレンチウイルス標的について、お客様がMOIを調整し最適化してください。
25 µLの最低3 x 10E8感染単位（IFU）/mLのレンチウイルス粒子1バイアル。 ロットに固有の力価情報については、データシートの“ウイルス力価”をご覧ください。
プロモーター
EF-1（伸長因子-1）
感染多重度（MOI）
MOI = 感染させた細胞数に対する感染性レンチウイルス粒子数（IFU）の比
高い形質導入効率およびシグナル強度を達成するためのニューロンに対する典型的なMOI値は、20～40の範囲です。 この目標に対して、一部の神経細胞タイプはより高いまたはより低いMOを必要とする場合があります
注：望ましい形質導入効率およびシグナル強度を達成するために、各細胞型およびレンチウイルス標的について、お客様がMOIを調整し最適化してください。
品質
HT-1080細胞を導入し、蛍光画像処理によって導入効率を判定することにより評価しました。
物理的形状
PEG沈殿
保管および安定性
保管および取扱い
レンチウイルスは、-80°Cで保存した場合に受領日から最低4カ月間安定です。 初回の融解後は速やかに氷上に置き、実用アリコートは-80°Cで凍結してください。 凍結アリコートは最低2ヵ月間保存できます。 これ以上凍結融解すると、ウイルス力価と導入効率の低下を招くおそれがあります。
安全性に関する重要事項
本製品に添付されている第3世代ベクターなどの複製欠損レンチウイルスベクターが、ヒトや動物で何らかの疾患を引き起こすことは知られていません。 しかし、レンチウイルスは一体化して宿主細胞ゲノムを形成する可能性があるため、挿入型変異のリスクをもたらすおそれがあります。 原料はリスクグループ2であり、BSL2管理下で取り扱う必要があります。 レンチウイルスベクターのバイオセーフティーに関する詳細な考察は、Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
レンチウイルスは、-80°Cで保存した場合に受領日から最低4カ月間安定です。 初回の融解後は速やかに氷上に置き、実用アリコートは-80°Cで凍結してください。 凍結アリコートは最低2ヵ月間保存できます。 これ以上凍結融解すると、ウイルス力価と導入効率の低下を招くおそれがあります。
安全性に関する重要事項
本製品に添付されている第3世代ベクターなどの複製欠損レンチウイルスベクターが、ヒトや動物で何らかの疾患を引き起こすことは知られていません。 しかし、レンチウイルスは一体化して宿主細胞ゲノムを形成する可能性があるため、挿入型変異のリスクをもたらすおそれがあります。 原料はリスクグループ2であり、BSL2管理下で取り扱う必要があります。 レンチウイルスベクターのバイオセーフティーに関する詳細な考察は、Pauwels, K. et al. (2009). State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations. Curr. Gene Ther. 9: 459-474.
法的情報
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
保管分類コード
10 - Combustible liquids
WGK
WGK 2
適用法令
試験研究用途を考慮した関連法令を主に挙げております。化学物質以外については、一部の情報のみ提供しています。 製品を安全かつ合法的に使用することは、使用者の義務です。最新情報により修正される場合があります。WEBの反映には時間を要することがあるため、適宜SDSをご参照ください。
Jan Code
17-10227:
試験成績書（COA）
製品のロット番号・バッチ番号を入力して、試験成績書（COA） を検索できます。ロット番号・バッチ番号は、製品ラベルに「Lot」または「Batch」に続いて記載されています。
ライフサイエンス、有機合成、材料科学、クロマトグラフィー、分析など、あらゆる分野の研究に経験のあるメンバーがおります。.
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