Descrizione generale
La fosforilazione delle proteine è un meccanismo fondamentale di cui si avvalgono tutte le cellule eucariotiche per la modulazione delle proprie funzioni. Anomalie della fosforilazione sono implicate nell'insorgenza e nello sviluppo di molte malattie, tra cui disturbi metabolici, malattie infiammatorie, cancro, ecc. Quando si osservano variazioni a carico della fosforilazione di una proteina, bisogna distinguere se essi sono da attribuire a cambiamenti negli eventi di fosforilazione o a variazioni dei livelli della proteina totale. Per distinguere le variazioni del processo di fosforilazione da quelle dell'espressione proteica, è importante normalizzare il segnale prodotto dalla proteina fosforilata rispetto a quello della proteina totale. A tal fine, è stato sviluppato il kit MILLIPLEX® MAP Phospho/Total p38 2-plex che, grazie al sistema Luminex, consente la rivelazione simultanea di p38 fosforilate (Thr180/Tyr182) e di p38 totali in un unico pozzetto. Secondo le schede informative del fornitore degli anticorpi, la coppia di anticorpi per p38 fosforilate rileva p38α, p38β e p38γ ma non p38-δ, mentre la coppia di anticorpi per p38 totali rileva solo p38α. Il saggio costituisce un′alternativa rapida e pratica alle procedure di Western blotting e di immunoprecipitazione per l′analisi di lisati cellulari. Ogni kit contiene i reagenti sufficienti per l'analisi di una piastra da 96 pozzetti.Il kit con microsfere magnetiche MILLIPLEX® Phospho/Total p38 2-Plex è stato appositamente sviluppato per la rilevazione simultanea di p38 fosforilate (Thr180/Thr182) e di p38 totali in un unico pozzetto con il sistema Luminex®. Il saggio costituisce un′alternativa rapida e pratica alle procedure di Western blotting e di immunoprecipitazione per l′analisi di lisati cellulari.
Specificità
La reattività crociata tra gli anticorpi diretti contro un determinato analita e gli altri analiti del pannello è al di sotto del limite di rivelazione o trascurabile.
Applicazioni
I saggi intracellulari Multiplex basati su microsfere si avvalgono della tecnologia Luminex per la quantificazione relativa simultanea di proteine coinvolte nelle vie di segnalazione, sia fosforilate, sia totali, in campioni tissutali o di lisati cellulari.Per risultati migliori, si raccomanda di incubare i campioni per tutta la notte (4°C).Questo saggio richiede 25 μL di lisato di cellule filtrato e diluito/pozzetto.Questo kit deve essere utilizzato insieme all′Assay Buffer 2 (in dotazione).Per questo saggio, si consiglia una concentrazione proteica nell′intervallo compreso tra 1 e 25 μg di proteine totali/pozzetto (ossia 25 μL/pozzetto a una concentrazione compresa tra 40 e 1.000 μg/mL).Analiti disponibili:p38 (Totale);p38 (Thr180/Tyr182)
Confezionamento
Piastra a 96 pozzetti
Stoccaggio e stabilità
Si raccomanda di conservare i componenti del kit a 2-8 °C.
Note legali
Luminex is a registered trademark of Luminex Corp
MILLIPLEX is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
xMAP is a registered trademark of Luminex Corp
Esclusione di responsabilità
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