Chromatographie sur couche mince
La chromatographie sur couche mince (CCM ou TLC) est une méthode qui s'appuie sur l'affinité, utilisée pour séparer les composés d'un mélange. La CCM est une méthode de séparation extrêmement polyvalente qui est largement employée dans l'analyse qualitative et quantitative d'échantillons. Elle peut servir à analyser quasiment toutes les classes de substances, y compris les pesticides, les stéroïdes, les alcaloïdes, les lipides, les nucléotides, les glycosides, les sucres et les acides gras.
En CCM, la phase stationnaire est une fine couche de matériau adsorbant, habituellement du gel de silice ou de l'oxyde d'aluminium, déposée à la surface d'une plaque inerte, généralement du verre, du plastique ou de l'aluminium. Une gouttelette d'échantillon est déposée à une extrémité de la plaque de CCM, puis la plaque est placée à la verticale dans une chambre d'élution close contenant un solvant organique (la phase mobile). Cette phase mobile progresse sur la plaque vers le haut par capillarité et les constituants de l'échantillon migrent sur des distances différentes, en fonction de leurs différentes affinités pour la phase stationnaire et la phase mobile. Lorsque le solvant atteint le haut de la plaque, cette dernière est retirée de la chambre et séchée. Les constituants ainsi séparés apparaissent sur la plaque sous forme de taches (ou spots), et le facteur de rétention (Rf) de chaque constituant est déterminé.
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Protocoles apparentés
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Processus et principes de la CCM
La CCM repose sur le principe de la chromatographie classique selon lequel les constituants d'un mélange se séparent entre une phase stationnaire et une phase mobile liquide en fonction de leurs affinités différentielles pour les deux phases.
Facteur de rétention (Rf) en CCM
Le facteur de rétention (Rf) mesure le déplacement des composés sur la plaque de CCM. Rf est défini comme la distance parcourue par un constituant individuel, divisée par la distance totale parcourue par le solvant. Sa valeur est toujours comprise entre zéro et un.
| Rf = | distance parcourue par le constituant |
| distance parcourue par le solvant |
En général, plus le constituant se lie à l'adsorbant de la phase stationnaire, plus sa migration sur la plaque de CCM est lente. Comme les adsorbants utilisés en CCM sont généralement polaires, les composés non polaires tendent à migrer plus rapidement sur la plaque, donnant un Rf élevé, alors que les composés polaires tendent à migrer plus lentement et ont un Rf plus faible.
Applications de la CCM
La CCM est largement utilisée dans de nombreuses industries et de nombreux domaines de recherche, notamment dans le domaine pharmaceutique, en analyse clinique, en toxicologie environnementale, dans l'agro-alimentaire, dans l'analyse de l'eau et des pesticides, et en cosmétique. Voici quelques applications types de la CCM :
- Analyse de résidus médicamenteux et d'antibiotiques dans les échantillons agro-alimentaires et environnementaux
- Identification et quantification des colorants, des ingrédients, des conservateurs et des édulcorants dans les produits agro-alimentaire et cosmétiques
- Contrôle qualité et tests de pureté sur les formulations pharmaceutiques
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