Système du promoteur T7

• Qu'est-ce que la séquence promotrice T7 ?
• Caractéristiques du système d'expression plasmidique T7
• Technologie des étiquettes MAT™
• Guide de sélection de systèmes d'expression utilisant le promoteur T7

 Qu'est-ce que la séquence promotrice T7 ?

Le promoteur T7 est une séquence d'ADN de 18 paires de bases qui s'étend jusqu'au site d'initiation de la transcription noté +1 (5' - TAATACGACTCACTATAG - 3') et qui est reconnue par l'ARN polymérase T7¹. Le promoteur T7 est couramment utilisé pour réguler l'expression génique de protéines recombinantes qui peuvent ensuite être utilisées pour diverses applications de recherche en aval².

 Caractéristiques du système d'expression plasmidique T7

Les vecteurs bactériens contenant le promoteur T7 permettent l'expression, la détection et la purification de protéines de fusion recombinantes à étiquettes FLAG^® et MAT™ dans E. coli. Plusieurs vecteurs contenant le promoteur T7 assurent un double marquage des protéines de fusion avec des étiquettes FLAG^® et MAT™. Ils confèrent une résistance à l'ampicilline afin de faciliter la sélection des transformants positifs. De plus, ces vecteurs contiennent le terminateur de transcription T1T2, l'origine de réplication pMB1 (dérivée de pBR322), l'origine f1 et le gène lacI pour la répression du promoteur T7.

Les vecteurs pT7-FLAG^® et pT7-MAT™ contiennent le promoteur T7/lac qui est un promoteur très fort. Ces vecteurs d'expression permettent d'obtenir des rendements en protéines recombinantes encore plus élevés que le système du promoteur tac. Toutefois, le promoteur T7 est connu pour son expression basale (ou "fuite d'expression"), ce qui peut constituer un inconvénient lorsque les protéines recombinantes sont toxiques pour la cellule hôte. C'est pourquoi nos vecteurs contiennent les séquences de l'opérateur lac (lacO) immédiatement en aval du promoteur afin de limiter la fuite d'expression. Contrairement au système du promoteur tac, les vecteurs pT7 doivent être exprimés chez des hôtes contenant une source de polymérase du phage T7, comme les souches lysogènes (DE3).

 Technologie des étiquettes MAT™

L'étiquette MAT™ ("Metal Affinity Tag", marqueur d'affinité métallique) (HNHRHKH) a été créée pour la purification de protéines de fusion à étiquette MAT™ recombinantes à l'aide de gels d'affinité au nickel et au cobalt HIS-Select. Les produits HIS-Select permettent une purification hautement sélective des protéines de fusion à étiquette histidine, comme les protéines de fusion MAT™. Une grande partie de nos nouveaux vecteurs utilisent l'étiquette MAT™, souvent en association avec la célèbre étiquette FLAG^®. Les vecteurs contenant une étiquette MAT™ sont déclinés en deux formats : pour marquage N-terminal ou C-terminal.

Figure 1. Gènes de la kanamycine et de l'ampicilline facilitant la sélection chez E. coli

Références

1. Rong M, He B, McAllister WT, Durbin RK. 1998. Promoter specificity determinants of T7 RNA polymerase. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95(2):515-519. https://doi.org/10.1073/pnas.95.2.515

2. Komura R, Aoki W, Motone K, Satomura A, Ueda M. High-throughput evaluation of T7 promoter variants using biased randomization and DNA barcoding. PLoS ONE. 13(5):e0196905. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0196905