Développement analytique et caractérisation pour virus adéno-associé ;(AAV)

Les thérapies géniques médiées par des virus adéno-associés (AAV) et tous les matériaux de départ servant de précurseur doivent être correctement caractérises afin de comprendre le lien entre les attributs de qualité du produit, les procédés de fabrication, la sécurité des patients et l'efficacité. Compte tenu de la diversité des sérotypes d'AAV et des stratégies de thérapie génique destinés à traiter d'innombrables troubles génétiques, il n'existe aucune solution standard de caractérisation des AAV adaptée à toutes les situations. Nos capacités de développement analytique et de validation de méthode adaptées à chaque phase d'un projet vous apportent les connaissances et le savoir-faire qu'il vous faut en matière de produit et de procédé pour élaborer un profil de produit cible de qualité (Quality Target Product Profile, QTPP), identifier les attributs de qualité essentiels (Critical Quality Attributes, CQA) de votre thérapie, alignés avec les informations sur la chimie, la fabrication et le contrôle (Chemistry, Manufacturing, and Control, CMC) des demandes de nouveau médicament expérimental (Investigational New Drug, IND) de thérapie génique chez l'homme, selon l'US FDA (2020).

Lors de l'examen de tous les facteurs que vous devez comprendre au sujet de votre thérapie par AAV, nous vous fournissons un avis d'expert centré spécifiquement sur les attributs de qualité de votre produit.

Facteurs liés au patient

Attributs du produit

Résultats cliniques

Marqueurs techniques

Chaque thérapie génique est unique. Tirez profit de l'expertise de nos scientifiques pour garantir la conformité, la robustesse et l'efficacité des méthodes appliquées à votre thérapie génique médiée par des vecteurs viraux. Nous travaillons en partenariat avec vous depuis le développement jusqu'à la commercialisation, pour que votre thérapie puisse arriver rapidement et en toute sécurité jusqu'aux patients.

ANALYSE D'AAV SUR PETIT VOLUME

L'une des plus grandes difficultés dans le développement de méthodes de caractérisation d'une nouvelle thérapie génique virale est d'utiliser efficacement la quantité limitée de produit représentatif produite en R&D.  Cette ressource étant souvent restreinte, il est crucial de procéder à des essais orthogonaux pour confirmer l'identité, la pureté et la puissance du produit, afin de comprendre la molécule et d'atténuer les éventuels risques au stade du développement.

Notre service d'analyse d'AAV sur petit volume vous offre la possibilité de rassembler, en utilisant des quantités réduites de matériel d'essai, des informations aux premiers stades du développement sur de multiples CQA en lien avec les caractéristiques suivantes :

• Identité et titre par ELISA
• Identité (et modifications post-traductionnelles) par LC-MS
• État d'agrégation et intégrité de la capside par SEC-MALS
• État d'agrégation par DLS
• ddPCR pour titre génomique

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DES ANALYSES QUI RÉDUISENT LES RISQUES ASSOCIÉS AU DÉVELOPPEMENT ET À LA FABRICATION

Pour vous aider à réduire les risques et à accélérer le développement de votre thérapie à base d'AAV et de son procédé de production, nous proposons un large choix de solutions d'analyse adaptées à diverses catégories de CQA et points de contrôle au niveau du procédé :

• Confirmation d'identité de plasmides, de récoltes en vrac, de substances pharmaceutiques et de produits médicamenteux
• Détermination du titre et de la puissance de récoltes en vrac, de substances pharmaceutiques et de produits médicamenteux
• Évaluation de la pureté de plasmides, de récoltes en vrac, de substances pharmaceutiques et de produits médicamenteux
• Analyse des résidus présents dans les substances médicamenteuses et les produits médicamenteux

Nous créons des programmes personnalisés pour dévoiler les attributs de votre vecteur du type AAV.

Caractérisation de capsides

• Identification de sérotypes d'AAV par ELISA
• Détection et identification de régions génomiques d'intérêt par PCR quantitative
• Séquençage du génome de vecteurs par NGS
• Poids moléculaire de protéines capsidiques par LC-MS
• Cartographie peptidique et modifications post-traductionnelles de protéines capsidiques par LC-MS
• Intégrité des capsides par SEC-MALS

Titre et puissance

• Titre de particules d'AAV par ELISA ou HPLC
• Titre génomique par ddPCR
• Titre infectieux : DICT50
• Évaluation de puissance de protéines exprimées par un AAV recombinant

Pureté

• Pureté de vecteurs du type AAV par SDS-PAGE ou CE-SDS
• Rapport capside vide/pleine par ultracentrifugation analytique (AUC) ou AEX-HPLC
• Agrégation de capsides d'AAV par DLS ou SEC
• Agrégats de vecteurs par DLS
• Surenroulement de plasmides

Composés résiduels

• ADN résiduel des cellules hôtes
• Protéines résiduelles des cellules hôtes
• Ligand d'affinité résiduel d'AAV par ELISA
• Réactifs de transfection (PEI par ex.), solvants et réactifs de traitement résiduels
• Albumine de sérum bovin (BSA) résiduelle

Pharmacopée

• pH
• Osmolalité
• Concentration en protéines totales
• Aspect
• Particules
• Intégrité du conditionnement
• Volume extractible

Sécurité

• Biocharge
• Agents viraux éventuels
• Mycoplasmes
• Endotoxines
• Stérilité
• AAV capables de se répliquer (rcAAV)

Documentation technique

Webinaire : Unveiling the Potential of your AAV Gene Therapy: Orthogonal Methods to Understand and Define CQAs
Note technique : Peptide Mapping of AAV by LC-MS
Note technique : Empty/Full Capsid Ratio of AAV by Sedimentation Velocity – Analytical Ultracentrifugation 

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