Essai des pyrogènes
L'essai des pyrogènes est une étape cruciale pour garantir la sûreté des produits pharmaceutiques parentéraux et des dispositifs médicaux. Faisant partie des tests de libération obligatoires, il permet d'éviter les réactions fébriles dangereuses induites par les substances pyrogènes. Le Test d'activation des monocytes (MAT pour Monocyte Activation Test) permet de détecter les pyrogènes d'origine endotoxinique et non endotoxinique en un seul test in vitro.
Aperçu du contenu
Test d'activation des monocytes (MAT)
Utilisé pour détecter une large gamme de pyrogènes endotoxiniques et non endotoxiniques dans des produits parentéraux pharmaceutiques et des dispositifs médicaux, le MAT vous offre une alternative in vitro aux tests classiques sur les animaux en conformité avec les directives réglementaires.
L'essai sur le lapin et le test LAL (lysat d'amébocytes de limule) sont largement utilisés pour la détection des pyrogènes. Les deux méthodes s'appuient sur des animaux et présentent certaines limites. L'essai des pyrogènes sur le lapin montre un manque de robustesse, car une réaction animale est susceptible de différer grandement d'une réaction humaine. Dans le test LAL, seules les endotoxines sont détectées, ce qui présente un risque pour la sécurité car le test ignore les pyrogènes non endotoxiniques susceptibles d'être présents dans l'échantillon testé.
Pour surmonter ces obstacles, le Test d'activation des monocytes (MAT) a été introduit dans la Pharmacopée européenne en 2010, en tant que méthode de la pharmacopée pour remplacer l'essai sur le lapin (chapitre 2.6.30 de la Ph. Eur.) et mentionné dans les conseils de la FDA pour l'industrie.
À noter: la Commission de la Pharmacopée européenne a pris la décision de mettre fin au test des pyrogènes sur le lapin conformément au principe des 3R, considérant que le MAT est la meilleure option alternative.
Lisez l'article et parlez-en avec nos experts pour initier le mouvement.
Test in vitro PyroMAT® pour détecter les pyrogènes de nature endotoxinique et non endotoxinique
Le système PyroMAT® s'appuie sur la lignée cellulaire Mono-Mac-6 (MM6) et utilise l'interleukine-6 (IL-6) comme marqueur de détection. Il offre tous les avantages du test d'activation des monocytes combinés à ceux de l'utilisation d'une lignée cellulaire.
- La détection d'une large gamme de pyrogènes : la sécurité du patient est assurée si l'ensemble des pyrogènes est testé. Tout comme l'essai des pyrogènes sur le lapin (RPT pour Rabbit Pyrogen Test), le MAT est efficace pour la détection aussi bien des endotoxines que des pyrogènes non endotoxiniques.
- Une plus grande diversité d'échantillons pouvant être testés : les méthodes les plus fréquemment employées, le RPT et l'essai de détection des endotoxines bactériennes (BET) ou LAL, sont limitées dans le type de produits qu'elles permettent de tester. Le MAT offre davantage de souplesse en matière d'applications.
- Un essai in vitro qui reproduit la réaction immunitaire humaine : pour un modèle prédictif et robuste qui réduit l'utilisation des animaux pour les tests en laboratoire.
- La conformité avec les réglementations et directives internationales : en adéquation avec les tendances éthiques de l'industrie et avec les demandes des autorités réglementaires de diminuer le recours aux essais sur les animaux.
- Une réactivité standardisée et une haute sensibilité (LD 0,05 UE/ml) La simplicité d'une lignée cellulaire prête à l'emploi qui évite à nos clients les contraintes liées à la culture cellulaire en termes de procédures et d'équipements.
- Des cellules qualifiées : en plus d'être citées dans la validation internationale de l'essai MAT, les cellules Mono-Mac-6 sont qualifiées pour l'expression de tous les récepteurs de type Toll (TLR) afin de garantir la détection d'une large gamme de pyrogènes.
Apprenez-en davantage sur les contrôles positifs des pyrogènes non endotoxiniques.
Contrôles positifs des pyrogènes d'origine non endotoxinique
Le chapitre 2.6.30 de la Pharmacopée européenne (Test d'activation des monocytes) requiert que les tests préparatoires incluent "au moins 2 ligands non endotoxiniques pour les récepteurs de type Toll […]. Le choix des pyrogènes non endotoxiniques utilisés devra refléter le(s) contaminant(s) le(s) plus probable(e) de la préparation en cours d'examen."
Pour répondre à cette exigence, nous fournissons une gamme étendue de contrôles positifs :
- Reflétant plusieurs types de contaminants habituellement rencontrés dans les procédés de production pharmaceutique (bactéries à Gram négatif et à Gram positif, virus et mycoplasmes).
- Ciblant plusieurs récepteurs de type Toll (TLR) des monocytes
Apprenez-en davantage sur les contrôles positifs des pyrogènes non endotoxiniques.
- La détection d'un large spectre de pyrogènes : tout comme l'essai des pyrogènes sur le lapin (RPT), le MAT est efficace pour la détection aussi bien des endotoxines que des NEP.
- Une gamme étendue de produits pouvant être testés : les méthodes les plus fréquemment employées, le RPT et l'essai de détection des endotoxines bactériennes (BET) et le LAL, sont limitées dans le type de produits qu'elles permettent de tester. Le MAT offre davantage de souplesse en matière d'applications.
- Un essai in vitro qui reproduit la réaction immunitaire humaine : pour un modèle prédictif et robuste qui réduit l'utilisation des animaux pour les tests en laboratoire.
- La conformité avec les réglementations et directives internationales : en adéquation avec les tendances éthiques de l'industrie et avec les demandes des autorités réglementaires de diminuer le recours aux essais sur les animaux.
- Du sang cryoconservé combiné provenant de 8 donneurs : pour s'approcher autant que possible de la réaction immunitaire humaine aux pyrogènes.
Optimisez ou simplifiez votre méthode d'essai des pyrogènes pour une validation aisée et des tests économiques avec notre offre de services :
- Services liés aux applications
- Services de validation
- Services de formation
Comparaison des essais des pyrogènes LAL, MAT et sur le lapin |
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Services d'étude de faisabilité, de mise au point de méthode, de validation et de formation pour vous soutenir lors de la mise en œuvre de l'essai des pyrogènes, discutez-en avec nos experts de l'essai des pyrogènes.
Documentation produit apparentée
- Brochure: PyroMAT® and PyroDetect
Used to detect a broad range of pyrogens in parenteral products such as pharmaceuticals, biopharmaceuticals or medical devices, the MAT gives an in vitro alternative to conventional animal testing in accordance with regulatory guidelines.
- Article: Pyrogen Contamination Risk by Dr. Tim Sandle
Unlike the LAL test, the MAT is a powerful in vitro test for the detection of both endotoxin and non-endotoxin pyrogens (NEPs) acting via the toll-like receptors (TLRs) pathway.
- Data Sheet: Validation Method - PyroMAT® System
The Monocyte Activation Test (MAT) was introduced in the European Pharmacopeia (Chapter 2.6.30) in 2010, as a compendial method that can be used to replace the Rabbit Pyrogen Test (RPT).
- Infographic: MAT Implementation Workflow
Implementation of our Monocyte Activation Test (MAT), the PyroMAT® system.
- Poster: Pyrogen Detection in Pharma QC: Moving Away from the RPT
We have demonstrated that the MM6 cells are suitable for the detection of various NEPs targeting different monocytic toll-like receptors, making MM6 cell line-based MAT suitable for RPT replacement.
- Application Note: Detection of NEP by MAT Using the PyroMAT® System
The monocyte activation test (MAT) is the human in vitro alternative to the rabbit pyrogen test, and allows the detection of the full range of pyrogens, including endotoxins and non-endotoxin pyrogens (NEPs).
- Application Note: Detection of Pyrogens in Vaccines with PyroMAT® System
The PyroMAT® System uses cryo-preserved Mono-Mac-6 (MM6) human monocytic cells as a source of monocytes. The response to pyrogenic substances is determined by measurement of Interleukin-6 (IL-6) produced by the MonoMac 6 cells.
- Questions & Answers about MAT. Dr. Tim Sandle Reponds
Risk considerations for the presence of pyrogens and the need for the MAT test in pharmaceutical processing.
- White Paper: Monocyte Activation Test
In this context, the in vitro pyrogen test based on human cells offers a valuable alternative to the rabbit pyrogen test.
- Application Note: Detection of Pyrogens in Hormone-based Drugs
For the quantification of the pyrogenic load of a sample, method A in accordance with the European Pharmacopeia can be conducted.
- Application Note: Detection of Pyrogens in FBS with PyroMAT® System
The response to pyrogenic substances is determined by measurement of Interleukin-6 (IL-6) produced by the Mono-Mac-6 cells. For this purpose, the ELISA-microplate supplied in the kit is coated with an antibody specific to IL-6.
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