Caractérisation de vecteurs viraux et contrôles de biosécurité
Les développeurs de thérapies géniques et de thérapies à base de cellules génétiquement modifiées fournissent des traitements vitaux à des patients du monde entier. Lorsqu'un nouveau produit permet d'envisager une étude clinique, les contrôles de biosécurité et la caractérisation constituent deux étapes essentielles pour atténuer les problèmes de sécurité bien avant l'administration aux patients. Il est également crucial d'identifier les problèmes de procédé ou de commercialisation pour que les thérapies répondant à un besoin urgent puissent être mises sur le marché dans un climat de confiance, rapidement et en toute sécurité.
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Parce que les produits de thérapie génique sont uniques, les méthodes de contrôle et de caractérisation classiques ne sont pas applicables aux vecteurs viraux tels que les virus adéno-associés (AAV), les rétrovirus/lentivirus ou les adénovirus. Les développeurs associent méthodes classiques et méthodes personnalisées pour réaliser une analyse complète de l'identité, de la puissance, de la sécurité et de la stabilité de leurs nouveaux traitements. Il va de soi que la mise au point et la validation de méthodes complètes entraînent un allongement des délais.
L'arrivée récente d'une nouvelle approche "plateforme" plus flexible permet aux développeurs de trouver un meilleur équilibre entre rapidité et personnalisation. Les services de thérapie génique BioReliance®, par exemple, incluent des tests pré-développés qui sont désormais intégrés dans les dossiers règlementaires de tous les pays. Ces tests ont été mis au point et validés pour autoriser la personnalisation de certains paramètres (par exemple, le gène d'intérêt), ce qui simplifie la procédure de validation ultérieure. Les développeurs peuvent examiner ces possibilités et apprendre comment une approche "plateforme" permet d'accélérer la mise sur le marché.
Contrôles applicables aux thérapies géniques |
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Matières premières
Pour un grand nombre de nouvelles thérapies, notamment les thérapies cellulaires, il est très difficile d'éliminer les produits d'origine humaine ou animale du procédé de fabrication. Si ces matières sont utilisées, il est indispensable qu'elles fassent l'objet de contrôles poussés pour s'assurer de l'absence d'agents non endogènes.
Banques de cellules
Les banques de cellules utilisées pour produire des thérapies biologiques doivent être entièrement caractérisées, conformément à la règlementation applicable aux produits biologiques, et soumises à des tests poussés pour garantir l'absence d'agents non endogènes. Ces tests peuvent inclure le contrôle du type de cellule, la recherche de bactéries, de champignons, de mycoplasmes voire de mycobactéries, des tests viraux à large spécificité ainsi que des tests de dépistage de rétrovirus ou de virus spécifiques.
Récolte en vrac non purifiée
Le contrôle qualité des récoltes en vrac non purifiées, qui peuvent contenir des cellules productrices transfectées, doit prévoir la vérification de l'identité et éventuellement la confirmation du gène d'intérêt. C'est également à ce stade qu'il convient de déterminer le titre des vecteurs. L'absence de vecteurs viraux compétents pour la réplication doit aussi être confirmée. Parmi les autres contrôles adaptés à cette matière première, citons la recherche de microorganismes (bactéries, champignons, mycoplasmes…) et les tests à large spécificité pour le dépistage de virus non endogènes.
Clairance virale
Contrairement aux produits biopharmaceutiques classiques et aux vecteurs viraux non enveloppés (comme les virus adéno-associés et les adénovirus), il est impossible de revendiquer la clairance virale du procédé de fabrication des vecteurs viraux enveloppés tels que les rétrovirus et les lentivirus. En effet, il n'est pas possible de séparer ou d'inactiver les contaminants viraux éventuels sans compromettre l'intégrité du produit. Des étapes d'inactivation et d'élimination des virus peuvent toutefois être intégrées dans le procédé de fabrication des vecteurs viraux non enveloppés, ce qui permet de revendiquer la réduction virale de bon nombre de ces procédés.
Récolte en vrac purifiée
Le contrôle qualité des récoltes en vrac purifiées doit inclure une vérification de l'identité, comme la confirmation du gène d'intérêt et la confirmation du sérotype de virus adéno-associé (AAV). La quantification du titre infectieux, du titre génomique et de la puissance sont des tests adaptés à cette matière première. Il convient également de confirmer l'absence de contamination microbienne et de vecteurs compétents pour la réplication. Enfin, il est recommandé de vérifier l'absence d'impuretés résiduelles provenant du produit ou du procédé.
Produit fini
L'identité du vecteur final doit être confirmée. Les contrôles qualité peuvent inclure le séquençage du gène d'intérêt ainsi que l'évaluation du titre infectieux, du titre génomique et de la puissance. Il convient également d'analyser la stérilité et le taux d'endotoxines. Enfin, les caractéristiques du produit final doivent être déterminées, notamment l'agrégation des vecteurs, le pH, l'osmolalité, l'aspect et les particules.
Workflow
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