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Uracilo-ADN-glucosilasa

recombinant from E. coli K 12

• Sinónimos: PCR, UDG
• Código UNSPSC: 41106300

Propiedades

• recombinante: expressed in E. coli
• Nivel de calidad: 100
• formulario: solution
• envase: pkg of 100 U
• fabricante / nombre comercial: Roche
• concentración: 1000 U/mL
• técnicas: PCR: suitable; mutagenesis: suitable
• color: colorless
• pH: 7.9-8.1 (68 °F)
• solubilidad: water: miscible
• idoneidad: suitable for molecular biology
• aplicaciones: life science and biopharma
• actividad extraña: RNases 10 units, none detected; endonuclease 20 units, none detected
• temp. de almacenamiento: −20°C

Descripción

Descripción general

La uracil-ADN glucosilasa (UNG) contiene la forma recombinante de gran actividad de la enzima con el mismo nombre que se encuentra en procariotas y eucariotas. Hidroliza los enlaces uracil-glucosídicos en el ADN monocatenario o bicatenario, cortando el uracilo y creando sitios abásicos sensibles a los álcalis en el ADN. Esos sitios abásicos pueden ser hidrolizados mediante tratamiento con endonucleasas, calor o álcali. Dependiendo de cómo se prepare el ADN, la uracil-ADN glucosilasa puede utilizarse para conseguir una rotura U-ADN general, específica de sitio o específica de cadena.

Especificidad

• La uracil-ADN glucosilasa hidroliza los enlaces uracil-glucosídicos en los sitios U-ADN del ADN monocatenario o bicatenario, cortando el uracilo y creando sitios abásicos sensibles a los álcalis en el ADN.
• La enzima es más activa en el ADN monocatenario que en ADN bicatenario.
• También se observó actividad en los oligonucleótidos de U-ADN pequeños y en el dUMP (Duncan, observaciones no publicadas).
• La uracil-ADN glucosilasa es inactiva en el ARN y el ADN nativo, carente de uracilo.

Inactivación por calor: 95 °C durante 10 min
La uracil-ADN glucosilasa permanece parcialmente activa (<10 %) después de un período de incubación de 30 minutos a 95 °C.

Aplicación

La uracil-ADN glucosilasa puede utilizarse para romper el ADN en cualquier sitio en el que se haya incorporado un residuo de desoxiuridilato. El U-ADN puede prepararse mediante métodos in vitro como la PCR. Puede conseguirse rotura general, específica de sitio o específica de cadena con la uracil-ADN glucosilasa, dependiendo de cómo se prepare el U-ADN. Por consiguiente, la uracil-ADN glucosilasa puede ayudarle a:

• Evitar la contaminación por arrastre en la PCR
• Aumentar la eficacia de los procedimientos de mutagénesis específica de sitio
• Marcar las sondas de oligonucleótidos

Calidad

La actividad de prevención del arrastre se valora añadiendo aproximadamente 10⁵dU que contenga las plantillas antes de la reacción de amplificación. Después del tratamiento con UNG, no pudieron detectarse productos de amplificación. La enzima no contiene exonucleasas ni endonucleasas contaminantes y se analiza para detectar la ausencia de ARNasas.

Definición de unidad

Una unidad se define como la cantidad de uracil-ADN glucosilasa requerida para degradar por completo 1 μg de ADN monocatenario purificado que contenga uracilo (bacteriófago M13, crecimiento en E. coli CJ236 dut-ung-) a +37 °C en 60 minutos.
Una unidad Lindahl se define como la cantidad de enzima necesaria para liberar 1 μmol de uracilo a +37 °C en 1 minuto. Según nuestra definición de unidad, una unidad Lindahl es comparable a 520 000 unidades.

Volumen de actividad: 1 U/μl

Forma física

La enzima se suministra como una disolución 1 U/μl en tampón de conservación.

Almacenamiento y estabilidad

Se puede congelar (después de la síntesis de ADN)

Otras notas

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos de diagnóstico.

Información de seguridad

• Código de clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• Clase de riesgo para el agua (WGK): WGK 1
• Punto de inflamabilidad (°F): No data available
• Punto de inflamabilidad (°C): No data available