UDGHL-RO

Uracile-ADN glycosylase thermolabile

recombinant from marine bacterium BMTU 3346

• Synonyme(s) : PCR, UDG
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.2.2.15 (BRENDA, IUBMB)
• Code UNSPSC : 41106300

Propriétés

• Source biologique: bacterial (marine bacterium BMTU 3346)
• Niveau de qualité: 100
• Produit recombinant: expressed in E. coli
• Forme: solution
• Conditionnement: pkg of 100 U (11775367001); pkg of 500 U (11775375001)
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Concentration: 1000 U/mL
• Technique(s): activity assay: suitable
• Couleur: colorless
• pH optimal: 8.3-8.9
• Solubilité: water: soluble
• Adéquation: suitable for enzyme test
• Application(s): life science and biopharma
• Activité étrangère: DNA decontamination:, present ( >= 10 e5 copies ); RNases with MS- II- RNA ≤10 units, none detected; Unspec.nucleases w. lambda-DNA 20 units, none detected; Unspec.nucleases w.M13mp9ss-DNA ≤20 units, none detected; Unspec.nucleases w.pBR 322-DNA ≤20 units, none detected
• Température de stockage: −20°C

Description

Description générale

L'uracile-ADN glycosylase thermolabile contient l'enzyme du même nom présente dans la bactérie marine BMTU 3346. Tout comme l'UNG d'E. coli, cette UNG hydrolyse les liaisons glycosidiques avec l'uracile dans l'ADN simple ou double brin, retirant l'uracile et créant des sites abasiques sensibles aux alcalis au sein de l'ADN. Ces sites abasiques peuvent être hydrolysés sous l'effet d'une endonucléase, de la chaleur ou d'un traitement alcalin. En fonction du mode de préparation de l'ADN, l'uracile-ADN glycosylase peut servir à réaliser des clivages de l'ADN-U de type général, spécifiques à un site ou spécifiques à un brin. Cette enzyme présente une plus faible thermostabilité et est donc plus facile à inactiver.

Caractéristiques de l'enzyme
L'enzyme BMTU 3346 est inactivée plus rapidement (2 minutes à +95 °C) que l'enzyme correspondante d'E. coli (10 minutes à +95 °C). Il a également été signalé que l'UNG d'E. coli reste partiellement active, provoquant la dégradation du produit de PCR à base de dU. À l'inverse, l'UNG thermolabile ne dégrade pas les produits de PCR à base de dU pendant au moins plusieurs heures d'incubation entre +2 et +8 °C. Il n'est donc pas nécessaire, avec cette préparation d'UNG, de congeler le produit issu de la PCR immédiatement après l'amplification ou de maintenir le mélange réactionnel à -70°C.

Spécificité

• L'uracile-ADN glycosylase hydrolyse les liaisons glycosidiques avec l'uracile des sites d'ADN-U de l'ADN simple brin ou double brin, retirant l'uracile et créant des sites abasiques sensibles aux alcalis au sein de l'ADN.
• L'enzyme agit à la fois sur l'ADN simple brin et l'ADN double brin.
• Elle est inactive sur l'ARN et l'ADN natif dépourvu d'uracile.
• Comme l'uracile-ADN glycosylase ne nécessite pas d'ion métallique, son activité n'est pas altérée par la présence d'EDTA.

Inactivation à la chaleur : 95 °C pendant 2 min

Application

L'uracile-ADN glycosylase peut être utilisée pour cliver l'ADN au niveau des sites comprenant un résidu désoxyuridylate. Du fait de la labilité de l'uracile-ADN glycosylase thermolabile sous l'effet de la chaleur, l'enzyme est principalement employée pour empêcher les contaminations croisées en PCR. Contrairement à l'enzyme d'E. Coli, cette préparation d'UNG permet de ne pas avoir à congeler le produit de PCR immédiatement après l'amplification et de ne pas avoir à maintenir le mélange réactionnel à -70 °C.

Remarque importante : Pour les techniques extrêmement sensibles comme la PCR en temps réel, nous recommandons notre uracile-ADN glycosylase LightCycler^® qui est optimisée pour cette application.

Caractéristiques et avantages

• Empêche les contaminations croisées en PCR.
• Augmente l'efficacité des procédures de mutagénèse dirigée.
• Permet de marquer des sondes oligonucléotidiques.
• Assure une inactivation plus rapide que l'enzyme correspondante d'E. coli en raison de sa plus faible thermostabilité.
• Ne provoque pas de dégradation des produits de dU-PCR pendant au moins plusieurs heures d'incubation entre +2 et +8 °C.

Contenu
L'enzyme est fournie sous la forme d'une solution de 1 U/μl dans du tampon de conservation.

Qualité

Contrôle fonctionnel : L'activité de prévention des contaminations croisées est évaluée en ajoutant environ 105 dU contenant des matrices avant la réaction d'amplification. Après traitement à l'UNG, aucun produit d'amplification n'a pu être détecté.
L'enzyme ne contient aucune endonucléase ou exonucléase contaminante et ne présente aucune activité RNase, selon les procédures de contrôle qualité actuellement en place.

Définition de l'unité

Une unité est définie comme la quantité d'uracile-ADN glycosylase requise pour dégrader entièrement 1 μg d'ADN simple brin à base d'uracile purifié (bactériophage M13, cultivé sur E. coli CJ236 dut-ung-) à +37 °C pendant 60 minutes.
Une unité Lindahl est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour libérer 1 mol d'uracile en 1 minute à 37 °C. Une unité Lindahl correspond à 520 000 unités d'après notre définition d'une unité.

Activité volumique : 1 U/μl

Autres remarques

Produit destiné aux applications générales de laboratoire.

Informations légales

LightCycler is a registered trademark of Roche

Informations sur la sécurité

• Mentions de danger: H412
• Conseils de prudence: P273 - P501
• Classification des risques: Aquatic Chronic 3
• Code de la classe de stockage: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 2
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash