Downstream processing de vecteurs viraux
Les procédés de purification de vecteurs viraux se sont longtemps appuyés sur des systèmes utilisés pour la production d'anticorps monoclonaux, qui ne sont pas conçus pour assurer le niveau de récupération nécessaire.
L'arrivée de nouvelles technologies spécialement conçues pour les procédés upstream de production de vecteurs viraux pour la thérapie génique offre la possibilité d'augmenter le rendement et la capacité de production. Parmi les approches qui peuvent être mises à profit pour optimiser les procédés downstream concernant les vecteurs viraux, on peut citer les suivantes :
- Les opérations d'ultrafiltration/diafiltration, notamment par filtration à flux tangentiel, pour la récolte et la purification des cellules ou des virus, la concentration et la diafiltration des protéines en aval, ainsi que la formulation finale
- Les procédés de chromatographie intensifiés qui réduisent le nombre d'étapes ainsi que leurs dimensions, grâce à des technologies telles que les adsorbeurs à membrane chromatographique à haute productivité et à usage unique.
Ces technologies en aval offrent la possibilité de réduire les temps de purification des vecteurs viraux de plusieurs heures à quelques minutes, tout en améliorant la récupération. En outre, elles peuvent faciliter la transposition à l'échelle supérieure, réduire l'empreinte du procédé et permettre une utilisation plus efficace des installations.
Clarification primaire
Le milieu brut contenant les vecteurs viraux est filtré en profondeur ou par une combinaison de centrifugation et de filtration en profondeur afin d'éliminer les gros débris cellulaires et autres contaminants.
Clarification secondaire
Le milieu clarifié à l'issue de la clarification primaire est davantage purifié par le biais d'étapes supplémentaires.
Ultrafiltration/Diafiltration
L'ultrafiltration et la diafiltration sont utilisées respectivement pour la concentration et l'échange de tampons. Le vecteur viral est séparé des impuretés par une filtration basée sur la taille. La diafiltration élimine le sel et d'autres molécules et les remplace par le tampon de votre choix.
Chromatographie
Au moins deux méthodes de chromatographie sont utilisées pour purifier le vecteur viral, notamment l'échange d'ions, l'affinité et l'exclusion stérique.
Filtration de virus
Le vecteur viral purifié est soumis à une nanofiltration avec des pores de 15 nm afin d'éliminer les virus adventices, les endotoxines et toute autre impureté ou agrégat restant.
Filtration stérilisante
La filtration stérilisante, ou la réduction de la biocharge, peut être utilisée plusieurs fois dans le procédé. Le flux d'alimentation passe à travers un filtre de grade stérilisant de 0,4 ou 0,2 micron afin d'éliminer les bactéries et autres micro-organismes qui ont été introduits au cours du procédé.
Remplissage final
Le vecteur viral purifié et stérile est versé dans le contenant final prévu à cet effet. La formulation, les matériaux d'emballage et les conditions de stockage doivent être soigneusement étudiés afin de garantir la stabilité et l'intégrité du produit.
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