RPOLT3-RO

T3-RNA-Polymerase

from Escherichia coli HB101

• Synonym(e): Polymerase, mRNA
• EC-Nummer: 2.7.7.6 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSC-Code: 12352204

Eigenschaften

• Biologische Quelle: Escherichia coli (HB101)
• Qualitätsniveau: 100
• Assay: 100% (SDS-PAGE)
• Form: solution
• Spezifische Aktivität: ≥20 U/μL
• Mol-Gew.: 100 kDa (single polypeptide chain)
• Verpackung: pkg of 1,000 U (11031163001); pkg of 5,000 U (11031171001)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Konzentration: <0.1 % (w/w)
• Methode(n): DNA sequencing: suitable; Northern blotting: suitable; Southern blotting: suitable; hybridization: suitable
• Farbe: colorless
• pH-Wert: 7.9 (39 °F); 8.0 (68 °F)
• Löslichkeit: water: miscible
• Eignung: suitable for molecular biology
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NP_418414
• UniProt-Hinterlegungsnummer: P0A8V2
• Anwendung(en): genomic analysis; life science and biopharma
• Fremdaktivität: Nicking activity 150 units, none detected; RNases 150 units; endonucleases 150 units, none detected
• Lagertemp.: −20°C
• Angaben zum Gen: Escherichia coli ... rpoB(948488)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Mit diesem Enzym kann homogen markierte Einzelstrang-RNA hergestellt werden. Transkripte können nicht-radioaktiv mit Biotin oder DIG-11-UTP bzw. radioaktiv bis zu einer hochspezifischen Aktivität mit [α-³²P]- oder [α-³⁵S]-markierten Nukleotiden markiert werden. T3-RNA-Polymerase ist eine DNA-abhängige RNA-Polymerase mit hoher Promotor-Spezifität. Nur DNA hinter dem T3-Promotor wird transkribiert.

Spezifität

Promotorspezifität
T3-RNA-Polymerase ist extrem promotorspezifisch und transkribiert nur Bakteriophage-T3-DNA oder hinter einem T3-Promotor klonierte DNA.
Hitzeinaktivierung: Die Reaktion wird durch Zugabe von 2 μl 0,2 M EDTA (pH 8,0) und/oder Erwärmung auf 65 °C gestoppt.

Anwendung

T3-RNA-Polymerase kann RNA von hinter einem T3-Promotor klonierten DNA-Templates transkribieren. Die Synthese kann mit markierten NTPs durchgeführt werden, um hochmarkierte RNA herzustellen. Synthetisierte RNA kann in vielen Anwendungen eingesetzt werden, einschließlich:

• RNA- oder DNA-Blotting-Techniken
• In-situ-Hybridisierung
• RNase-Schutz-Untersuchungen: Durch das Enzym synthetisierte Transkripte werden als Vorläufer-RNA zum Untersuchen von RNA-Splicing und -Prozessierung verwendet.
• Synthese von RNA mit Cap-Struktur in vitro unter Zugabe von m7GpppG oder m7GpppA über GTP oder ATP während der Transkriptionsreaktion. Die generierte Antisense-RNA kann in Zellen eingeführt werden, um die Expression der entsprechenden Gene zu unterdrücken.

Verpackung

1 Kit mit 2 Komponenten

Qualität

Nach Maßgabe der aktuellen Qualitätskontrollverfahren frei von Endonuklease, Nicking-Aktivität und RNasen. Funktionstest mit dem SP6/T7-Transkriptions-Kit.

Spezifikationen

Volumenaktivität: = 20 U/μl
Synthese von Hybridisierungssonden: T3-RNA-Polymerase ermöglicht die hocheffiziente Produktion von homogen markierter RNA. Diese markierte RNA kann als Hybridisierungssonden in Southern, Northern und Dot Blots sowie In-situ-Hybridisierungen verwendet werden.
Geeignete Markierungen: Transkripte können nicht-radioaktiv mit Biotin-16-UTP, DIG-11-UTP oder Fluorescein-12-UTP markiert werden. Sie können auch radioaktiv bis zu einer hochspezifischen Aktivität mit [a-32P]- oder [a-35S]-markierten Nukleotiden markiert werden.

Hinweis: Roche hat 10x konzentrierte RNA-Markierungsmischungen, die spezifisch für die DIG-, Biotin- oder Fluorescein-Markierung konzipiert wurden. Diese Mischungen funktionieren gut mit T3-RNA-Polymerase.

Einheitendefinition

Eine Einheit ist die Enzymaktivität, die 1 nmol CMP innerhalb von 60 Minuten bei +37 °C in säurefällbare RNA einbaut.

Volumenaktivität: ≥20 U/μl

Angaben zur Herstellung

Aktivator: BSA/Spermin

Lagerung und Haltbarkeit

Behälter dicht verschlossen an einem trockenen und gut belüfteten Ort aufbewahren.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Nur Kit-Komponenten

• T3 RNA Polymerase, in buffer, pH 7.9 ≥20 U/μl
• Transcription Buffer 10x concentrated

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H319
• P-Sätze: P264 - P280 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313
• Gefahreneinstufungen: Eye Irrit. 2
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 2
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash