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FastStart SYBR Green Master

sufficient for 500 reactions, sufficient for 5000 reactions, suitable for qPCR, suitable for RT-qPCR

• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 500 reactions; sufficient for 5000 reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Leistungsmerkmale: dNTPs included: no; hotstart
• Hersteller/Markenname: Roche
• Verpackung: pkg of 500 x 20 μL reactions (04673484001); pkg of 5000 x 20 μL reactions (04673492001)
• Methode(n): RT-qPCR: suitable; qPCR: suitable
• Aufnahme: purified DNA
• Nachweisverfahren: probe-based

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

FastStart SYBR Green Master; Gebrauchsanweisung

FastStart^™ SYBR^® Green Master ist ein gebrauchsfertiges Heißstart-Reaktionsgemisch ohne ROX für die quantitative Polymerase-Kettenreaktion (qPCR) und die Reverse-Transkriptase-qPCR (RT-qPCR) auf Echtzeit-PCR-Systemen mit Ausnahme der LightCycler^® Geräte. Dieser Mastermix vereinfacht die Vorbereitung von Reaktionen für die DNA-Detektion und -Analyse. In Kombination mit einem Echtzeit-PCR-Gerät, geeigneten PCR-Primern und einer Hydrolysesonde ermöglicht FastStart^™ TaqMan^® Probe Master die äußerst empfindliche Detektion und Quantifizierung bestimmter DNA-Sequenzen.
SYBR^® Green I ist ein doppelstrangspezifischer DNA-Farbstoff. Während jeder Phase der DNA-Synthese bindet sich der im Reaktionsgemisch enthaltene SYBR^® Green I Farbstoff an amplifizierte PCR-Produkte. Das Amplicon kann anhand seiner Fluoreszenz detektiert werden.
Heißstart-Protokolle verbessern die Spezifität, Sensitivität und Ausbeute der PCR erheblich. Hitzelabile Blockiergruppen auf einigen der Aminosäurereste der FastStart^™ Taq DNA-Polymerase inaktivieren das modifizierte Enzym bei Raumtemperatur. Daher findet in der Zeit, in der sich Primer unspezifisch binden können, keine Verlängerung statt. Die FastStart^™ Taq DNA-Polymerase wird durch Entfernung der Blockiergruppen bei hohen Temperaturen (z. B. einem Vorinkubationsschritt bei +95 °C) aktiviert.
FastStart^™ SYBR^® Green Master kann zur Amplifikation und Detektion jedes DNA- oder cDNA-Targets, einschließlich GC- oder AT-reicher Targets, verwendet werden. Allerdings wäre es nötig, das Detektionsprotokoll an die Reaktionsbedingungen des jeweils verwendeten Echtzeit-PCR-Geräts anzupassen und für jedes Target spezifische PCR-Primer zu entwickeln.
Durch die Kombination dieses Master-Mixes und unserem Transcriptor First Strand cDNA-Synthesekit erzielen Sie bei der zweistufigen qRT-PCR ausgezeichnete Ergebnisse.

Anwendung

FastStart^™ SYBR^® Green Master wird in der qPCR und in der zweistufigen qRT-PC im SYBR^® Green I Detektionsformat verwendet. Es wird außerdem eingesetzt bei:

• Quantitativen Polymerase-Kettenreaktionen (qPCR) zur Titerquantifizierung adenoassoziierter Viren (AAV).
• qPCR zur Bestimmung des Expressionsgrades verschiedener Col6a1-3-Gene in Abhängigkeit von Glyceraldehyd-3-phosphatdehydrogenase (GAPDH).
• Quantitativen Echtzeit-Polymerase-Kettenreaktionen (qRT-PCR) der mRNA des an Protein G gekoppelten Östrogenrezeptors-1 (GPER).
• qRT-PCR zur Erforschung der Genexpressionen.

FastStart^™ SYBR^® Green Master ist zur Verwendung mit allen Echtzeit-qPCR-Geräten mit Ausnahme der LightCycler^® Geräte vorgesehen.

Leistungsmerkmale und Vorteile

• Verbesserte PCR-Sensitivität und -Spezifität:

FastStart Taq-DNA-Polymerase ist eine zuverlässige Mischung und minimiert die Bildung nicht-spezifischer Amplifikationsprodukte mittels Heißstart-PCR.

• Keine Überbewertung von qPCR-Ergebnissen:

Eliminiert unspezifische Amplifikationsprodukte und Primer-Dimere, welche die Menge an gebundenem quantifiziertem SYBR-Grün I erhöhen würden.

• Amplifikation und Detektion zahlreicher DNA- und cDNA-Targets:

Amplifiziert Fragmente bis zu einer Länge von 500 Basenpaaren, einschließlich GC- oder AT-reicher Targets. Funktioniert mit allen Echtzeit-PCR-Geräten mit Ausnahme der LightCycler^® Geräte.

• Verwendung aller Echtzeit-PCR-Geräte mit Ausnahme der LightCycler^® Gerät:

Erhältlich in zwei Formulierungen – eine Version mit dem ROX Referenzfarbstoff und eine ohne ROX.

• Zeit- und Arbeitsersparnis bei der qPCR-Vorbereitung:

Anwenderfreundlicher, 2-fach konzentrierter Mastermix, der ein Mischen von Komponenten, ein Titrieren von MgCl2 oder eine Reihe anderer, zeitraubender Optimierungsschritte überflüssig macht.

• Keine falsch-positiven Ergebnisse infolge von Verschleppungskontamination:

Das Gemisch enthält dUTP und kann so mit Uracil-DNA-Glycosylase verwendet werden, um eine Verschleppung kontaminierender DNA aus früheren PCR-Reaktionen auszuschließen.

Komponenten

FastStart SYBR Green Master, 2-fach konzentrierter Mastermix aus FastStart Taq-DNA-Polymerase, Reaktionspuffer, Nukleotiden (dATP, dCTP, dGTP, dUTP) und SYBR Green I.

Qualität

Funktionstest: Jede Charge wird unter Anwendung von drei Templates – einem GC-reichen, einem AT-reichen und einem langen (etwa 440 Basenpaare) Template – einer qPCR-Leistungsprüfung unterzogen.

Sonstige Hinweise

qPCR-Targets
Grundsätzlich kann FastStart SYBR Green Master zur Amplifikation und Detektion jedes DNA- oder cDNA-Targets, einschließlich GC- oder AT-reicher Targets, verwendet werden. Allerdings wäre für jedes Target erforderlich:

• Anpassung des Detektionsprotokolls an die Reaktionsbedingungen des Echtzeit-PCR-Geräts, und
• designspezifische PCR-Primer für das Target.

Allgemeine Empfehlungen entnehmen Sie dem Bedienerhandbuch Ihres Echtzeit-PCR-Geräts.
Zwei Versionen erhältlich
Der Mastermix ist in zwei Versionen erhältlich – eine Version mit dem ROX-Referenzfarbstoff und eine ohne ROX.
Vermeiden von Verschleppungskontaminationen
Dieses Master enthält dUTP, das in PCR-Produkte integriert wird und so dazu beiträgt, falsch positive Ergebnisse infolge von Verschleppungskontaminationen zu verhindern. In nachfolgenden PCRs können Sie Uracil-DNA-Glycosylase hinzufügen, um jegliche Uracil-haltigen Verschleppungskontaminationen (Amplifikationsprodukte aus früheren PCRs) abzubauen.
qRT-PCR
Bei Kombination dieses Mastermixes mit unserem Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit können Sie eine zweistufige qRT-PCR durchführen. Das Kit erzielt hervorragende Ergebnisse und arbeitet effizient mit allen Echtzeit-PCR-Geräten.

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Rechtliche Hinweise

FastStart is a trademark of Roche

LightCycler is a registered trademark of Roche

SYBR is a registered trademark of Life Technologies

TaqMan is a registered trademark of Roche Molecular Systems, Inc.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash