Referenční standardy pro analýzu polyfenolových katechinů

James S, Walbridge, Kathleen Kiefer

Reporter US Vol 25.4

techservice@sial.com

Katechiny se v dnešním světě, který dbá na své zdraví, staly žhavým tématem. Současný výzkum naznačuje, že katechiny napomáhají zdraví tím, že:

• Snižují tvorbu aterosklerotických plátů
• Potlačují růst nádorů tím, že inhibují enzymy, které se podílejí na šíření rakovinných buněk, likvidují látky podporující vznik nádorů a blokují chemické karcinogeny
• Podporují růst nádorů tím, že inhibují enzymy, které se podílejí na šíření rakovinných buněk./li>
• Snižování vysokého krevního tlaku
• Ochrana před infekcemi zažívacího a dýchacího ústrojí
• Snižování hladiny cholesterolu
• Snižování hladiny glukózy v krvi
• Předcházení vzniku ledvinových kamenů
• Snižování pravděpodobnosti vzniku revmatoidní artritidy
• Vytváření pevnějších kostí
• Snižování zánětů

Katechiny jsou skupinou polyfenolických sloučenin, které vykazují silné antioxidační a také pozoruhodné antibakteriální, antivirové a protizánětlivé vlastnosti. Ve vysokých koncentracích se nacházejí v listech Camellia sinensis (čaj) a v menším množství v čokoládě, hroznech, malinách, jablkách, hruškách a víně. Nejvyšší koncentraci mají velmi mladé lístky a pupeny Camellia sinensis, z nichž se vyrábí bílý čaj; následují o něco zralejší lístky, z nichž se vyrábí zelený čaj. Starší listy používané k výrobě čajů Oolong a černých čajů jsou více zoxidované a obsahují vyšší koncentrace dalších polyfenolů včetně theaflavaninů a thearubiginů.

Katechiny, stejně jako další antioxidanty, pomáhají chránit buňky před oxidačním stresem. Kyslík je pro život životně důležitý, nicméně je také začleněn do reaktivních forem kyslíku včetně peroxidu vodíku, kyseliny chloristé a volných radikálů, jako je hydroxylový radikál a superoxidový aniont. Reaktivní formy kyslíku poškozují buňky a podílejí se na pomalé řetězové reakci poškození vedoucí k srdečním chorobám, rakovině a mnoha dalším onemocněním. Antioxidanty fungují tak, že zabraňují vzniku reaktivních forem kyslíku nebo s nimi reagují dříve, než mohou buňky poškodit.

Listy Camellia sinensis obsahují nejméně osm polyfenolových katechinů. Šest převládajících katechinů v čajových listech je katechin, galokatechin galát(GCG), epigalokatechin (EGC), epikatechin (EC), epikatechin galát (ECG) a epigalokatechin galát (EGCG), přičemž EGCG je nejhojněji zastoupen.

Analytický problém

Analytici stanovující koncentrace katechinu mají problém s nedostatkem komerčně dostupných referenčních roztoků katechinu. Jednou z možností je připravit referenční standardy z jednotlivých katechinových sloučenin vlastními silami. To obvykle není nákladově efektivní řešení z následujících důvodů:

• Vysoce čisté katechinové sloučeniny se často obtížně shánějí a jsou velmi drahé.
• Katechiny, čisté i v roztoku, vyžadují správné skladování.
• Jsou citlivé na teplo, světlo a vzduch.
• Příprava standardů je časově náročný proces

Naše řešení

Pro uspokojení této potřeby bylo vyvinuto osm analytických referenčních roztoků katechinů. Tyto standardy značky Supelco jsou připraveny, dávkovány, baleny a skladovány tak, aby se minimalizovala chemická degradace a zajistila se jejich maximální skladovatelnost. Každý standard je dodáván s certifikátem analýzy, který obsahuje stanovení čistoty. Katechiny lze také připravit ve speciálně přizpůsobených kombinacích koncentrace, složek a rozpouštědla s využitím našeho programu chemických standardů na zakázku. Kromě toho byla vyvinuta jednoduchá a robustní metoda LC-UV s použitím kolony Ascentis RP-Amide (obrázek 1). Metoda je rovněž kompatibilní s detekcí pomocí MS. Poskytuje reprodukovatelné analytické výsledky a vynikající tvar píků.

Obrázek 1. HPLC analýza šesti primárních katechinů zeleného čaje (565324-U)

Odkazy

1. Zhu X, Chen B, Ma M, Luo X, Zhang F, Yao S, Wan Z, Yang D, Hang H. 2004. Simultaneous analysis of theanine, chlorogenic acid, purine alkaloids and catechins in tea samples with the help of multi-dimension information of on-line high performance liquid chromatography/electrospray?mass spectrometry. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 34(3):695-704. https://doi.org/10.1016/s0731-7085(03)00605-8

2. Bell DS, Campbell W, Cramer HM. Molecular Interactions Contributing to Alternative Selectivity of Polar-Embedded HPLC Stationary Phases. Supelco Publication. T405014

3. Lun Su Y, Leung LK, Huang Y, Chen Z. 2003. Stability of tea theaflavins and catechins. Food Chemistry. 83(2):189-195. https://doi.org/10.1016/s0308-8146(03)00062-1

4. Friedman M, Jürgens HS. 2000. Effect of pH on the Stability of Plant Phenolic Compounds. J. Agric. Food Chem.. 48(6):2101-2110. https://doi.org/10.1021/jf990489j

5. American Chemical Society. [Internet]. Available from: http://pubs.acs.org/journals/jafcau/index

6. American Chemical Society. [Internet]. Available from: http://pubd.scs.org/journals/jacau/index.html

7. He L, Penzotti S, Bedu-Addo F. Cardinal Health Pharmaceutical Development. 14 Schoolhouse Road, Somerset, NJ 08873..