Albuminy a transportní proteiny
Mnoho molekul je nestabilních nebo nerozpustných, pokud existují v nekomplexní formě. In vitro se albuminy a další nosné proteiny často používají k vazbě, sekvestraci a stabilizaci řady důležitých malých molekul a proteinů. Albuminy jsou jednoduché ve vodě rozpustné bílkoviny, které se nacházejí v živočišných tekutinách a tkáních a v menší míře i v rostlinách. Albuminy se používají při biomanufacturingu terapeutických monoklonálních protilátek a rekombinantních proteinů.
Poskytujeme albuminy pro komplexní aplikační potřeby, včetně buněčných kultur, kvantifikace proteinů, stabilizace enzymů, ELISA a procesů souvisejících s protilátkami. Spolu s albuminy z různých zdrojů nabízíme tyto základní proteiny v různých formátech a složeních.
Přečtěte si více informací o
Albuminy v buněčných kulturách
Albuminy, zejména z hovězího séra (BSA), jsou důležitou součástí mnoha bezsérových systémů buněčných kultur, zejména těch, které využívají hybridomové buňky nebo buňky vaječníků čínského křečka (CHO). V médiích pro buněčné kultury funguje albumin tak, že váže a dodává buňkám v kultuře další důležité molekuly. Protože všechny albuminy nemají v kultivačních médiích stejnou účinnost, doporučuje se vybírat ty, které byly testovány pro použití v buněčných kulturách.
Hovězí sérový albumin (BSA) je globulární protein (~66 kDa MW), který se díky své stabilitě a absenci interferencí s biologickými reakcemi používá v mnoha biochemických aplikacích. Struktura BSA je jednoduchý polypeptidový řetězec sestávající z přibližně 583 aminokyselinových zbytků a bez sacharidů. Více informací o struktuře proteinu BSA, molekulové hmotnosti BSA, vlastnostech a aplikacích se dozvíte v našem průvodci fyzikálními vlastnostmi a aplikacemi BSA.
BSA je klasický pracovní kůň mezi albuminovými produkty používaný v mnoha aplikacích. Naše rozmanité formáty albuminu z hovězího séra zahrnují čistoty v rozmezí 95-99 %. Vyrábíme a distribuujeme BSA purifikovaný různými primárními metodami včetně pravé Cohnové frakcionační metody, modifikovaných etanolových frakcionačních metod, tepelného šoku a chromatografie. Další purifikační kroky mohou zahrnovat krystalizaci nebo filtraci pomocí dřevěného uhlí. Pro usnadnění jsou naše BSA definovány podle způsobu přípravy:
- Chromatografická purifikace albuminu obvykle poskytuje více konzervované nativní konformace proteinu než metody frakcionace etanolem a tepelným šokem.
- Metoda ethanolu a tepelného šoku kombinuje oba procesy s použitím Cohnové frakcionace k provedení počáteční purifikace, po níž následuje tepelný krok k dalšímu přečištění albuminu na ≥ 99 % pomocí agarózové elektroforézy.
- Ethanolová frakcionace je frakcionační metoda, která zahrnuje úpravu koncentrace ethanolu, pH a teploty. Na rozdíl od metody tepelného šoku se tento proces udržuje při nízké teplotě, která zajišťuje nedenaturační podmínky pro proteiny a zachovává nativní strukturu a funkci albuminu.
- Frakcionační proces tepelného šoku spočívající v úpravě tepla a pH se opírá o přídavek stabilizátoru proteinu. Tento přídavek umožňuje albuminu snášet zvýšenou teplotu > 65 °C. Většina ostatních plazmatických proteinů během tohoto procesu denaturuje a vysráží se, čímž se získá albumin se zvýšenou čistotou.
Lidský sérový albumin (HSA)
Lidský sérový albumin (HSA) je nejrozšířenější bílkovina v lidské plazmě s molekulovou hmotností ~66 kDa (na základě aminokyselinového složení). Sérový albumin lze označit jako Cohnovu frakci V. Toto pojmenování je převzato z původní Cohnovy metody frakcionace sérových bílkovin pomocí srážení studeným etanolem, protože sérový albumin byl při použití Cohnovy metody nalezen v páté etanolové frakci. Od té doby se pro označení sérového albuminu bez ohledu na metodu přípravy používá termín "Cohnova frakce V". Vyrábíme lidské sérové albuminy pomocí procesu frakcionace studeným alkoholem odvozeného z tradiční Cohnova metody i z metody tepelného šoku a nabízíme nativní i rekombinantní verze HSA ve formě prášku i roztoku.
Další albuminové produkty
Naše portfolio zahrnuje další albuminové produkty pro specifické aplikace vyžadující lidské a jiné nehovězí proteiny. Rekombinantní lidské albuminy a albumin bez živočišných složek (ACF) jsou dodávány ve vodných pufrech nebo lyofilizovaných práškových formátech. Mezi dostupné albuminy jiných druhů patří albuminy získané z následujících zdrojů:
- slepičí vaječný bílek
- myší sérum
- sérum potkanů
- sérum prasat
- hovězí sérum
- sérum skotu /li>
Naše albuminy se vyznačují vysokou čistotou a vynikající rozpustností, aby bylo zajištěno nízké pozadí při kvantifikačních testech bílkovin a aby se minimalizovaly interference v bioprocesech.
Transferriny a náhrady transferinu
Buňky potřebují železo, aby na sebe vázaly dostupný kyslík z extracelulárního prostředí. Transferriny jsou jednořetězcové glykoproteiny nacházející se v séru, které usnadňují vychytávání železa v kultivačním médiu a jeho následný intracelulární transport.Ačkoli je transferin fyziologicky optimální metodou pro dodávání železa buňkám v kultuře a byl proto nedílnou součástí výroby biofarmak, jako jsou monoklonální protilátky, systémy s nižším rizikem bez použití zvířat vedly k určitému přijetí malomolekulárních alternativ k transferinu v biovýrobě. Mnohé z těchto alternativ transferinu jsou chelátory železa, které se musí používat s příslušnými protokoly v kultivačních systémech, protože mnohé z nich nezvládají redoxní cyklus železa, a proto mohou přispívat k oxidačnímu stresu. Naše činidla pro buněčné kultury zahrnují kompletní výběr transferinů a náhrad transferinu.
Související zdroje
- Albumin v buněčných kulturách
Prozkoumejte úlohu sérového albuminu v systémech bezsérových buněčných kultur pro biomanufacturing.
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?