Příprava médií pro mikrobiální kultury

Typy kultivačních médií

Mikrobiální kultivační média by měla poskytovat optimální podmínky pro růst všech nebo určitých typů mikroorganismů. Přesné složení média závisí na kultivovaném druhu a cíli použití. V závislosti na mikroorganismech je třeba upravit pH média. Mikrobiální kultivační média se klasifikují na základě několika parametrů, jako jsou chemické složky, fyzikální povaha a funkce. Typy médií definované podle těchto parametrů jsou popsány níže.

Klasifikace mikrobiálních kultivačních médií podle chemického složení

Syntetické (definované) médium je médium s definovanou chemickou látkou běžně používané ke kultivaci fotoautotrofů, jako jsou sinice a fotosyntetizující protisty. Široce se používá ve výzkumu, ke studiu metabolismu mikroorganismů.

Komplexní médium je médium obsahující nedefinované chemické složky, jako je pepton, masový extrakt a kvasnicový extrakt, které splňují nutriční požadavky různých mikroorganismů. Používá se ke kultivaci rychlených mikrobů s komplexními nutričními požadavky.

Mikrobiální kultivační média založená na fyzikální podstatě

Tvrdé médium používá ke ztuhnutí tekutého bujónu 1-7 % agar-agaru nebo 10-20 % želatiny. Pevná média se používají k vzájemné izolaci různých mikrobů, k zakládání čistých kultur, k výrobě agarových preparátů a k výrobě agarových střepů.

Tekuté médium neobsahuje žádná zpevňující činidla. Po naočkování a inkubaci jsou buňky viditelné ve formě malé hmoty nebo rozmazání bujónu.

Mikrobiální kultivační média podle způsobu přípravy

Médium připravené k použití je pevné nebo tekuté médium dodávané v deskách, lahvích, zkumavkách nebo jiných nádobách, ve formě připravené k použití nebo připravené k použití po přetavení a doplnění.

Médium připravené z komerčně dehydratovaných přípravků je médium v suché formě, které vyžaduje rehydrataci a zpracování před použitím, čímž vzniká buď kompletní médium, nebo nekompletní médium, do kterého se před použitím přidávají doplňky.

Médium připravené z jednotlivých složek je médium vyrobené mikrobiologickou laboratoří výhradně z jeho jednotlivých složek.

Médium na vyžádání je médium vyráběné systémem, který udržuje vysoce koncentrované, sterilní kultivační médium dostupné v laboratoři po dobu několika dnů. Ředěním sterilní vodou dokáže vyrobit požadované množství média připraveného k použití na vyžádání, aniž by bylo nutné jej autoklávovat.

Příprava mikrobiálních kultivačních médií

Příprava média z dehydratovaných komerčních přípravků by se měla provádět podle pokynů výrobce. Složení základních složek, jako jsou peptony, kvasničné extrakty, agar, pufrovací látky a antibiotika, se upravuje tak, aby bylo dosaženo konzistence média. Požadované množství dehydratovaného média nebo jednotlivých složek se rozpustí v destilované vodě za stálého míchání a následného zahřívání (je-li to nutné). Média obsahující agar by měla být před zahříváním dostatečně namočena za řádného míchání. Musí se upravit pH a médium se dávkuje do vhodných nádob ke sterilizaci vlhkým teplem v autoklávu. Látky citlivé na teplo (např. proteiny, enzymy) se sterilizují pomocí membránových filtrů.

Kultivační média se musí skladovat při stanovených teplotách, aby se zabránilo změně složení, a ne déle, než je doba použitelnosti výrobku. Aseptická příprava a skladování jsou nezbytné pro ochranu kultivačních médií před mikrobiální infekcí. Ztráty vody při skladování lze minimalizovat nepropustným obalem a/nebo skladováním při teplotě 5 °C ± 3 °C. Chemickou degradaci, např. oxidaci nebo ztrátu antimikrobiálních látek, lze zpomalit ochranou před světlem, teplem a dehydratací.