Milieux de séparation cellulaire pour les applications diagnostiques, pharmaceutiques et la recherche

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SÉPARATION CELLULAIRE AVEC LE SYSTÈME ACCUSPIN™ ET LES MILIEUX HISTOPAQUE^®

Le très prisé système ACCUSPIN™ avec Histopaque^®-1077 utilise des tubes à centrifuger stérilisés par rayonnement pour créer deux chambres distinctes avec une barrière en polyéthylène haute densité poreux (le "fritté"). Ce système permet l'ajout de sang total anticoagulé dans la chambre supérieure sans risque qu'il soit mélangé avec le milieu de séparation Histopaque^® qui se trouve dans la chambre inférieure. Le milieu à gradient de densité Histopaque^® permet une séparation claire des lymphocytes et des cellules mononucléaires (à savoir des monocytes). Les agrégats d'érythrocytes et les granulocytes deviennent légèrement hypertoniques, ce qui augmente leur vitesse de sédimentation et se traduit par la formation de granulés au fond du tube ACCUSPIN™. Une fois le processus de séparation terminé, les cellules isolées peuvent alors être caractérisées, cultivées, analysées ou utilisées dans des applications downstream telles que la cytométrie en flux, les essais à base de cellules, l'analyse moléculaire, le développement pharmaceutique ou le développement de thérapies cellulaires.

MILIEUX À GRADIENT DE DENSITÉ IODÉS HISTOPAQUE^®

Les milieux Histopaque^® sont conçus pour séparer différents types de cellules en fonction de leur densité. Ils sont couramment employés en recherche pharmaceutique et biomédicale pour isoler et purifier certaines populations de cellules. Les milieux Histopaque^® sont des solutions stérilisées par filtration de polysaccharose et de diatrizoate de sodium, de densité ajustée avec précision et ayant fait l'objet d'analyses pour vérifier l'absence d'endotoxines. Ces milieux de séparation prêts à l'emploi facilitent la récupération rapide et optimale des cellules viables à partir de petits volumes de sang total. Les milieux de séparation Histopaque^® sont typiquement utilisés dans les applications suivantes : Isolement de cellules mononucléées de sang périphérique (PBMC) : les milieux Histopaque^® sont souvent employés pour isoler les PBMC à partir d'échantillons de sang total. Les PBMC englobent les lymphocytes, les monocytes et d'autres cellules nucléées. En intercalant le milieu Histopaque^® entre l'échantillon de sang et un tube à centrifuger, la centrifugation provoque la séparation des PBMC des autres constituants du sang comme les globules rouges et les plaquettes. Fractionnement cellulaire : les milieux Histopaque^® peuvent servir à fractionner des populations cellulaires mixtes en couches distinctes en fonction de leur densité. En disposant une couche de milieu de suspension dans un tube à centrifuger et en ajoutant avec précaution la suspension cellulaire, la centrifugation entraîne la formation de couches distinctes représentant les différents types de cellules. Cette technique permet de séparer et de purifier les cellules en vue d'une analyse ou d'une expérimentation ultérieure. Isolement de types de cellules spécifiques : les milieux de séparation Histopaque^® peuvent être utilisés pour isoler des populations cellulaires particulières en fonction de leur densité ou de marqueurs particuliers. En superposant prudemment le milieu de suspension et la suspension cellulaire, la centrifugation sépare les cellules recherchées des autres cellules. Cette technique est particulièrement utile pour les chercheurs qui étudient certains types de cellules ou qui souhaitent enrichir des populations cellulaires rares. Produits dans le cadre d'un management de la qualité conforme à l'ISO 9001, les produits Histopaque^® soumis à des tests de performance spécifiques à chaque lot assurent une séparation uniformément sélective des lignées de cellules sanguines, une séparation optimale des cellules non déformées viables et une interférence cellulaire externe minimale.

MILIEUX À BASE DE SILICE COLLOÏDALE PERCOLL^®

Les milieux à base de silice colloïdale sont des suspensions colloïdales de particules de silice revêtues de polyvinylpyrrolidone (PVP) d'un diamètre de 15-30 nm, typiquement utilisées en recherche biomédicale et pharmaceutique pour séparer et purifier les cellules. La PVP réduit les interactions des particules avec le matériel biologique et stabilise le colloïde dans une solution saline isotonique. Sa densité peut être ajustée en modifiant la concentration de la solution Percoll^®, ce qui permet aux chercheurs de personnaliser le gradient pour l'adapter aux besoins spécifiques de leurs séparations. Notre milieu colloïdal Percoll^® possède une force osmotique extrêmement faible qui change peu avec la densité. De plus, l'osmolalité des gradients formés par centrifugation est facilement ajustée en ajoutant la quantité appropriée de saccharose ou de solution tampon. Les gradients Percoll^® sont parfaits pour les séparations isopycniques de cellules, d'organites, de vésicules membranaires et même de certains virus.

SELS INORGANIQUES

Les milieux en gradient ioniques, aussi connus sous le nom de gradients ioniques ou solutions ioniques, sont utilisés dans les techniques de séparation cellulaire pour séparer les cellules en fonction de leur charge de surface ou de leurs propriétés électriques. Ces milieux créent un champ électrostatique ou un différentiel de charge, qui permet de séparer les cellules de charges de surface différentes. Parmi les techniques de séparation cellulaire utilisant des gradients ioniques, on peut citer l'électrophorèse, la diélectrophorèse (DEP) et la focalisation isoélectrique (FIE). Le choix du milieu et de la technique dépend de la nature des cellules à séparer, du mécanisme de séparation souhaité et des objectifs expérimentaux. Nos milieux en gradient ioniques, composés de sels de métaux lourds concentrés, sont exclusivement utilisés pour les séparations isopycniques d'acides nucléiques. Le chlorure de césium et le sulfate de césium sont les sels de métaux lourds avec des densités en gradient jusqu'à 1,91 g/cm³ les plus largement utilisés. Parmi les autres sels utilisés, citons l'iodure de sodium, le bromure de sodium et les sels de rubidium. Choisir et concevoir le gradient ionique et les techniques à utiliser nécessitent d'examiner avec soin certains facteurs tels que le pH, la conductivité, la composition du tampon et les propriétés électriques des cellules étudiées.

MILIEUX À GRADIENT DE DENSITÉ IODÉS NON IONIQUES

Les milieux à gradient de densité iodés non ioniques sont des substances spéciales utilisées avec des techniques de séparation et de purification dans divers domaines, notamment la biologie, la biochimie et le diagnostic clinique. Ces milieux sont habituellement basés sur des composés iodés qui forment des gradients de densité et qui permettent de séparer les particules d'après leur densité. Les milieux à gradient de densité iodés non ioniques fonctionnent selon le principe de la centrifugation en gradient de densité. La structure de la plupart des composés iodés utilisés dans les milieux à gradient de densité populaires s'appuie sur des composés iodés comme l'acide tri-iodobenzoïque contenant un groupe hydrophile fixé pour améliorer leur solubilité et former un gradient de densité continu en solution aqueuse. Nous fournissons des solutions d'iohexol plus denses (par exemple, Nycodenz^® et Histodenz™) qui minimisent la déshydratation des particules biologiques. L'iohexol est non toxique et non métabolisé par les cellules mammifères.

ALCOOLS POLYHYDRIQUES

Notre offre de médias en gradient non ionique à base d'alcool polyhydrique comprend des gradients de saccharose qui sont largement utilisés dans les séparations de macromolécules par zone de taux et pour la séparation isopycnique de virus et d'organites cellulaires. Leurs avantages sont leur nature stable, leur inertie et leur faible coût, et leurs inconvénients incluent la nature concentrée et hypertonique de la solution. Nous proposons également une solution de glycérol ayant une densité inférieure aux solutions de saccharose correspondantes, empêchant ainsi l'activité de certaines enzymes tout en étant facilement éliminée sous vide.

POLYSACCHARIDES

Nous fournissons le milieu du type polysaccharide le plus couramment utilisé, Ficoll^®, pour contourner les problèmes de force osmotique élevée liés à l'utilisation des solutions de saccharose. Les polymères synthétiques du milieu Ficoll^® sont constitués de poly(éthylène glycol) (PEG) recouvert de polyvinylpyrrolidone. Ils sont couramment utilisés pour préparer des solutions à gradient de densité. Les solutions Ficoll^® sont largement employées dans diverses applications biologiques et biochimiques, en particulier la séparation et l'isolement de cellules. La solution est produite par la polymérisation de molécules de saccharose avec de l'épichlorhydrine pour donner un polysaccharide avec un poids moléculaire moyen de 400 000. Les solutions Ficoll^® en dessous de 20 % (p/v) ont une densité de 1,07 g/cm³ et sont considérées comme inertes sur le plan osmotique. Le principal inconvénient de la solution Ficoll^® tient dans sa nature plus visqueuse que celle des solutions de saccharose comparables. Les solutions Ficoll^® jouent un rôle important dans divers processus de recherche et développement du secteur pharmaceutique, facilitant l'isolement, la purification et la caractérisation des cellules, virus et autres éléments biologiques, et contribuant ainsi à faire progresser la découverte de médicaments, l'immunothérapie et d'autres applications pharmaceutiques. Elles sont couramment employées dans les techniques de séparation cellulaire, en particulier pour isoler les cellules mononucléées à partir de sang périphérique ou d'autres sources de cellules. En disposant une couche de suspension cellulaire sur un gradient de densité Ficoll^® et en procédant à une centrifugation, les cellules recherchées, par exemple les lymphocytes ou les monocytes, peuvent être séparées des autres types de cellules et des composants superflus comme les globules rouges ou les granulocytes. Les solutions Ficoll^® sont aussi utilisées dans la centrifugation à gradient de densité, une technique qui sépare les particules ou les molécules en fonction de leur densité de flottaison. Durant la centrifugation, les particules ou les cellules migrent au travers du gradient Ficoll^® et s'immobilisent aux positions correspondant à leurs densités respectives. Cela permet de séparer et de fractionner les différents éléments présents dans un mélange hétérogène.