P6556

Protéinase K from Tritirachium album

lyophilized powder, ≥30 units/mg protein

• Synonyme(s) : Endopeptidase K
• Numéro CAS: 39450-01-6
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 254-457-8
• Numéro MDL: MFCD00132129
• Code UNSPSC : 12352204
• eCl@ss : 32160410
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Forme: lyophilized powder
• Niveau de qualité: 300
• Activité spécifique: ≥30 units/mg protein
• Poids mol.: 28.93 kDa
• Technique(s): DNA extraction: suitable
• Solubilité: H₂O: soluble 1 mg/mL, clear, colorless
• Activité étrangère: Dnase ≤30 Kunitz units/mg solid; RNase ≤0.003 Kunitz units/mg solid
• Conditions d'expédition: wet ice
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

La protéinase K est utile pour l′inactivation protéolytique des nucléases lors de l′isolement de l′ADN et de l′ARN.
Elle est utilisée pour l′élimination des endotoxines liées aux protéines cationiques telles que le lysozyme et la ribonucléase A.
Elle est utile pour l′isolement des mitochondries hépatiques, de levure et de haricot mungo
et elle est utilisée pour la détermination de la localisation des enzymes sur les membranes.
On l′utilise pour le traitement des coupes de tissus incluses en paraffine pour exposer les sites de liaison à l′antigène pour le marquage par anticorps et
pour la digestion des protéines des échantillons de tissu cérébral pour la recherche sur les prions responsables des encéphalopathies spongiformes transmissibles (EST). Le produit P6556 est fourni sous forme de poudre lyophilisée. Le produit P6556 a été utilisé pour dégrader la protéine de cristallin humain

Le produit P6556 est fourni sous forme de poudre lyophilisée. Le produit P6556 a été utilisé pour dégrader la protéine de cristallin humain Les essais de « footprinting » à la protéase au moyen de la digestion par la protéinase K peuvent révéler des interactions de surface entre protéines. L′enzyme proposée par Sigma a été utilisée dans l′étape de pré-hybridation des embryons de poule. Elle a également été employée pour l′enrichissement en PrP^Sc, une protéine de prion présente dans les échantillons de tremblante du mouton, du hamster et de la souris.

Utile pour l′inactivation protéolytique des nucléases lors de l′isolement de l′ADN et de l′ARN.
Élimine les endotoxines qui se lient aux protéines cationiques telles que le lysozyme et la ribonucléase A.
S′est avéré utile pour l′isolement des mitochondries hépatiques, de levure et de haricot mungo.
Détermination de la localisation des enzymes sur les membranes.
Traitement des coupes de tissus incluses en paraffine pour exposer les sites de liaison à l′antigène pour le marquage par anticorps.
Digestion des protéines des échantillons de tissu cérébral pour la recherche sur les prions responsables des encéphalopathies spongiformes transmissibles (EST).

Actions biochimiques/physiologiques

La protéinase K présente une large gamme de spécificité et dégrade de nombreuses protéines, même dans leur forme native. Elle coupe principalement les liaisons peptidiques au niveau du groupe carboxyle des acides aminés aliphatiques et aromatiques comportant des groupes α-aminés bloqués. Le pH optimal se situe entre 7,5 et 9,0 et le point isoélectrique est 8,9 Ca²⁺ (1-5 mM)est requis pour l′activation. La protéinase K est inhibée par le diisopropyl fluorophosphate (DIFP) et le fluorure de phényl méthyl sulfonyle (PMSF).

La protéinase K est une sérine protéase très stable et hautement réactive. Des études de cristallographie et de structure moléculaires ont indiqué que cette enzyme appartient à la famille des subtilisines, présentant une triade catalytique au site actif (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴). Elle est stable dans un vaste éventail d′environnements : pH, sels de tampon, détergents (SDS) et température. En présence de 0,1 à 0,5 % de SDS, la protéinase K reste active et peut digérer diverses protéines et nucléases dans les préparations d′ADN, sans compromettre l′intégrité de l′ADN isolé.

Définition de l'unité

Une unité hydrolyse l′hémoglobine dénaturée par l′urée et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole de tyrosine par min à pH 7,5 et à 37 °C (couleur obtenue avec le réactif de Folin-Ciocalteu).

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08,GHS07
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H315,H319,H334,H335
• Conseils de prudence: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classification des risques: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organes cibles: Respiratory system
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable
• Équipement de protection individuelle: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves