E64-RO

E-64

N-[N-(L-3-Trans-carboxirane-2-carbonyl)-L-leucyl]-agmatine

• Synonyme(s) : trans-Époxysuccinyl-L-leucylamido(4-guanidino)butane, L-trans-3-Carboxyoxiran-2-carbonyl-L-leucylagmatine, N-(trans-Époxysuccinyl)-L-leucine 4-guanidinobutylamide
• Formule empirique (notation de Hill): C₁₅H₂₇N₅O₅
• Numéro CAS: 66701-25-5
• Poids moléculaire : 357.41
• Numéro Beilstein : 1405664
• Numéro MDL: MFCD00080261
• Code UNSPSC : 12352202
• ID de substance PubChem : 329798998

Propriétés

• Niveau de qualité: 100
• Pureté: >95% (HPLC)
• Forme: powder
• Poids mol.: M_r 357.4
• Conditionnement: pkg of 10 mg (10874523001); pkg of 25 mg (11585681001)
• Fabricant/nom de marque: Roche
• Plage de pH: 2-10
• Solubilité: ethanol: water (1:1): soluble 20 mg/mL
• Température de stockage: 2-8°C
• Chaîne SMILES: CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H]1O[C@H]1C(O)=O)C(=O)NCCCCNC(N)=N
• InChI: 1S/C15H27N5O5/c1-8(2)7-9(20-13(22)10-11(25-10)14(23)24)12(21)18-5-3-4-6-19-15(16)17/h8-11H,3-7H2,1-2H3,(H,18,21)(H,20,22)(H,23,24)(H4,16,17,19)/t9-,10+,11+/m0/s1
• Clé InChI: LTLYEAJONXGNFG-HBNTYKKESA-N

Description

Spécificité

The thiol protease inhibitor E-64 specifically inhibits papain and other cysteine proteases such as cathepsin B and L, bromelain, and ficin. Cathepsin A and D are not inhibited. L-lactate dehydrogenase from porcine heart is not inhibited, although the enzyme contains a functional thiol group.

Application

Le E-64 est un ligand efficace de purification par affinité des protéases à cystéine. Son couplage à une matrice d′affinité thiolée supprime l′irréversibilité de ses liaisons tout en conservant leur spécificité.

E-64 is used for the inhibition of papain and other cysteine proteases such as cathepsin B and L, bromelain, and ficin during isolation and purification of proteins and enzymes.
It has been used in the affinity chromatography for the purification of hemoglobin receptors.
The inhibition of thiol proteases by E-64 appears to be of a non-competitive nature between the SH components. The inhibition is also irreversible, and is altered after gel filtration (Sephadex column) or dialysis after incubation of papain with E-64. The enzyme and inhibitor combine in an equimolar ratio.

Actions biochimiques/physiologiques

Le E-64 est un inhibiteur de protéases à cystéine irréversible, puissant et hautement sélectif. Il ne réagit pas avec le groupement thiol fonctionnel des enzymes autres que les protéases, telles que la L-lactate déshydrogénase ou la créatine kinase. Le E-64 n′inhibe pas les protéases à sérine (hormis la trypsine) comme d′autres inhibiteurs de protéases à cystéine, la leupeptine et l′antipaïne. Le groupement trans-époxysuccinyl (fraction active) du E-64 se fixe de manière irréversible au groupement thiol actif de nombreuses protéases à cystéine telles que la papaïne, l′actinidase et les cathepsines B, H et L pour former une liaison thioéther. Le E-64 est un inhibiteur de protéases à cystéine particulièrement utile dans les études in vivo du fait de son inhibition spécifique, de sa capacité à pénétrer dans les cellules et les tissus et de sa faible toxicité.

Notes préparatoires

Le E-64 est soluble dans l′eau. Il est possible de préparer une solution à 20 mg/ml dans l′eau (avec chauffage éventuel). Une solution mère peut par exemple être réalisée sous forme de solution aqueuse 1 mM. L′inhibition des protéases est effective aux concentrations de 1 à10 μM. Les solutions mères en milieu aqueux sont stables plusieurs mois à -20 °C. Les solutions diluées sont stables plusieurs jours à pH neutre. Le E-64 est stable de pH 2 à pH 10, mais est instable dans l′ammoniac ou HCl. Le E-64 est également soluble dans le DMSO ; une solution 10 mM peut être préparée dans du DMSO sec et stockée à -20 °C. Les dilutions ultérieures peuvent être réalisées dans du milieu de culture. Des solutions pour injection ont été préparées en dissolvant du E-64 dans du chlorure de solution à 0,9 % ou dans une quantité minimale de solution saturée en bicarbonate de sodium puis par dilution avec du chlorure de solution à 0,9 % (après ajustement du pH à 7,0 avec de l′acide acétique).

Working concentration: 0.5 to 1.0 μg/ml (1.4 to 28.0 μM)
Working solution: Soluble to 20 mg/ml (stock solution) in a 1:1 (v/v) mixture of ethanol and water (vortexing or slight warming in water bath (40 °C) may facilitate dissolution). Also soluble in a neutral water/methanol solution, in water, methanol, acetic acid, pyridine and DMSO. Sparingly soluble in ethanol and propanol. Insoluble in acetone, chloroform, ethyl ether and benzene.
Storage conditions (working solution): -15 to -25 °C
Solutions are stable for one month when stored in aliquots at -15 to -25 °C.

Reconstitution

Soluble to 20 mg/ml in a 1:1 (v/v) mixture of ethanol and water. Solutions are stable for one month when stored in aliquots at -15 to -25 °C.

Autres remarques

For life science research only. Not for use in diagnostic procedures.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08
• Mention d'avertissement: Warning
• Mentions de danger: H371
• Conseils de prudence: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Classification des risques: STOT SE 2
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 2
• Point d'éclair (°F): does not flash
• Point d'éclair (°C): does not flash